| 地壳中磷元素(以P2O5计)的平均含量大约为0.28％，可分为有机磷和无机磷两大类。无机磷主要以钙、镁、铁、铝等形态结合为磷酸盐，有机磷以卵磷脂、核酸、磷脂为主。土壤中的磷素大部分以迟效性状态存在，了解土壤有效磷的供应状况，对于施用磷肥有着直接的指导意义。土壤有效磷的测定方法很多，由于浸提剂的不同所得结果也不同。浸提剂的选择主要是根据各种土壤性质而定。提取剂是否合适?必须通过田间试验评价(测定值与作物产量进行相关研究)。一般情况下，石灰性土壤和中性土壤采用碳酸氢钠浸提(Olsen法)较满意；微酸性土壤可应用0.03NNH4F—0.025NHCl浸提(Bray—I法)和碳酸氢钠浸提；但中等酸性土壤采用Bray-I法优于Olsen法；强酸性／：壤则需用更强酸性的提取剂如0.03NNH4F—0.1NHCl(Bray—Ⅱ法)。同—土壤用不同浸提剂提取的有效磷量相差很多，用同一浸提剂但浸提的条件不同如土液比、温度、时间、振荡方式等因子，对结果也会有很大影响。所以有效磷只是一个相对指标，只有用同一方法、在相同条件下测得的结果，才有相对比较的章义。因此在报告结果时，必须说明测定的方法和条件。
1．0.5MNaHCOs浸提—钼锑抗比色法(Olsen法)
(一)测定原理
石灰性土壤中的磷主要以Ca—P(磷酸钙盐)的形态存在，中性土壤中则Ca—P、A1—P(磷 酸铝盐)、Fe—P(磷酸铁盐)都占有一定比例。由于浸提液(0.5MNaHCO~)提高了CO32-离子的活性，使其与Ca2+形成CaCO3沉淀，从而降低了Ca2+的活性，因磷酸钙的溶解度>碳酸钙，故磷酸根的活性增加，同时也可使比较活性的Fe—P 和AI-P起水解作用而浸出，从而增加了碳酸氢钠提取中性和石灰性土壤速效磷的能力。此法提取时受温度影响很大，以20℃为宜。
(二)主要仪器和试剂
1.往复式振荡机；分光光度汁或光电比色计。
2.0.5MNaHCO3浸提剂 称42.0克碳酸氢钠(NaHCO3三级)溶于800毫升水中，稀释至990毫升，用4NNaOH溶液调节pH至8.5(用pH计测定)，稀释至1升，保存于塑料瓶中。如超过1月，用时需重新校正pH值。
3.无磷活性炭粉 将活性炭粉先用1：1盐酸浸泡过夜，然后在平板漏斗上抽气过滤，用水洗到无Cl-为止。再用o．5MNaHCOo溶液浸泡过夜，在平板漏斗上抽气过滤，用水洗尽NaHC03，最后检查到无磷为止，烘干备用。
4．硫酸钼锑贮存液 浓硫酸(H2s04，二缎)153毫升缓慢地倒入约400毫升水中，搅拌、冷却。10克钼酸铵(二级)溶解于约60℃的300毫升水中，冷却。然后将硫酸溶液缓缓到入钼酸铵溶液中，再加100毫升0.5％酒石酸锑钾(KSbOC4H4O6·1/2H2O，二级)溶液，最后用水稀释至1升，避光贮存；此贮存液含1％钼酸铵，5.5NH2S04。
5．钼锑抗显色剂 1.50克抗坏血酸(C6H8O6，左旋，旋光度+21一+220，二级)溶于100毫升钼锑贮存液中，此液须随配随用，有效期一天。
6．二硝基酚指示剂0.2克2，6—二硝基酚或2，4—二硝基酚~C6H3OH(N02)2)溶于100毫升水中。
7．5ppm P标准溶液0.4390克磷酸二氢钾(KH2PO4，二级，105℃烘干2小时)溶于200毫升水中，加入5毫升浓H2SO4，转入1升容量瓶中，用水定容。此为100ppm P标准溶液，可长期保存。取此溶液准确稀释20倍，即为5ppmP标准溶液，此溶液不宜久存。
(三)操作步骤
1．称取通过1毫米筛孔的风干土壤样品5.00克于250毫升三角瓶中，加入一小勺无磷活性炭粉和0.5MNaHCO3100毫升，在20—25℃下振荡30分钟(振荡机速率每分钟150~180次)，取出后用干燥漏斗和无磷滤纸过滤于三角瓶中。同时做空白试验。
2．吸取浸出液10--20毫升于50毫升容量瓶中，加二硝基酚指示剂2滴，用稀硫酸和稀氢氧化钠溶液调节pH至溶液刚呈微黄色(小心慢加，边加边摇，防止产生的CO2，使溶液喷出瓶口)，等C02充分放出后，加钼锑抗显色剂5毫升，摇匀，用水定容。在室温高于15℃的条件下放置20分钟后，在分光光度计上用波长700纳米(光电比色计用红色滤光片)比色，以空白试验溶液为参比液调零点，读取吸收值，在工作曲线上查出显色液的ppm P数。颜色在8小时内可保持稳定。
3．工作曲线的绘制 分别吸取5ppmP标准溶液o，l，2，3，4，5，6毫升于50毫升容量瓶中，加水稀释至30毫升，加入钼锑抗显色剂；毫升，摇匀，定容。即得0，0.1，0.2，
0.3，0.4，0.5，0.6ppmp标准系列溶液，与待测溶液同时比色，读取吸收值。在方格坐标纸上以吸收值为纵坐标，Pppm数为横坐标，绘制工作曲线。
(四)结果计算
有效Pppm＝ 显色液Pppm *显色液体积*分取倍数/风干土重（g）
显色液Pppm——以工作曲线查得显色液的Pppm数
显色液体积——50毫升；
分取倍数——浸提液总体积100毫升／吸取浸出液毫升数
W——风干土重，克。
1．必须严格控制浸提液的温度。为照顾各地的具体情况，规定温度幅度为20~25℃，具体分析时各批样品应在这个变幅范围内选择一个温度，便于各批结果进行相对比较。
2．用稀硫酸中和NaHC03后再加钼锑抗试剂的优点是钳锑抗试剂可通用于其它各项磷的测定，缺点是当分析大批土样时繁琐和费时，所以若大批分析土样时，可按下述方法另外配制钼锑抗试剂和进行测定，它适用于土壤速效磷在2．5一150ppm范围内的土壤。土壤专用钼锑抗试剂12.0克钼酸铰溶于250毫升水中。另将176毫升浓硫酸注入800毫升水中，冷却后加入0.30克酒石酸氧锑钾，搅溶。再将两溶液相混和，加水至2升。临用当天，每100毫升溶液中加入0.53克抗坏血酸，亢分泥匀，避光存放。
测定方法 吸取浸出液l0.00毫升(含1．25~i5微克P。土壤有效磷在30-60ppm之间者
改吸5毫升，在60~150ppm之间改吸2毫升，并用NaHCO3浸提剂补足至10毫升)放入25毫升容量瓶中，加5.00米毫升钼锑抗试剂，加水定容，摇匀后放置30分钟，在分光光度计700纳处测读吸收值，以空白调零点。 |