（一）培养细胞的常规观察

培养细胞在体外的生长过程是一个动态的连续过程，细胞的数目、形态以及培养液的颜色、澄明度等在一定程度上都是细胞生长状况的表现。借助于肉眼或显微镜的帮助，通过对上述常规指标的观察，可以有效地帮助我们及时把握细胞的生长信息，适时、适当采取相关措施培养好细胞。

1.培养液的观察

培养液的颜色和澄明度是肉眼观察的两个重要指标。新鲜的培养液一般呈现桃红色，pH约为7.2-7.4，培养过细胞后的培养液由于含有大量细胞代谢产物而使得pH降低，颜色也逐渐变黄。培养液颜色的这种变化是由其所含有的酚红指示剂来显示的，酚红会随溶液的pH变化而改变颜色，成为指示培养液pH的最直观指标。培养液颜色变黄是细胞需要更换培养液的信号。一般情况下，大多数细胞需要每2-3天换一次新鲜培养液。需要注意的是，如果细胞在换液后或传代后培养液很快就会变黄，这可能是细菌污染或培养瓶不干净造成的。

正常情况下，无论颜色如何变化，培养液都能保持澄明。一旦发现培养液变混浊，就应注意是否有污染发生。上述情况多适用于贴壁生长的细胞，对于悬浮生长的细胞来说，随着细胞密度的升高，培养液也会在一定程度上变浑，判断其是否污染应结合溶液颜色变黄的速度、细胞增殖的速度、显微镜下是否可观察到污染以及其他一些方法进行判断。

2．显微镜检查

显微镜检查简称镜检，相差显微镜是利用光的衍射与干涉原理制造的，是观察透明活细胞的最佳工具，可以清晰地帮助我们看到生活状态下细胞的形态结构特点，并动态观察和记录细胞的附着、贴壁、伸展、移动、分裂等过程。

在不具备相差显微镜的实验室，普通的倒置显微镜也不失为一种好的观察工具。生长状况良好的细胞在倒置显微镜下观察时较为明亮、折光性也强，细胞的轮廓不清但形态规则。生长状况不佳的细胞在倒置显微镜下观察时折光性变弱、轮廓变得清晰，细胞形态也变得不规则，细胞间的间隙变大，细胞中常出现颗粒样物质，情况更严重时，还可见到脱落死亡的细胞增多。

（二）细胞活力测定

1．台盼蓝染色测定细胞活力

死细胞和受损细胞的细胞膜通常因缺损而不完整，这样某些染料分子便可穿过细胞膜进入到细胞内部并使细胞被染上相应的颜色。与死细胞和受损细胞不同，活细胞的细胞膜结构完整，能阻止染料进入细胞而拒染。台盼蓝便是这样的染料，经台盼蓝染色的死细胞或受损细胞常为浅蓝色。除台盼蓝外，伊红、苯胺黑也是常用的鉴定细胞活力的染料，所不同的是，经伊红和苯胺黑染色的死细胞或受损细胞分别为红色和黑色。

2．四甲基偶氮唑盐（MTT）法测细胞相对数目和相对活力

四唑盐比色实验是一种常用的检测细胞存活与生长状况的方法，实验所用之显色剂是一种能接受氢原子的染料，化学名为3-(4,5-二甲基噻唑）-2，5-二苯基四氮哩澳盐，商品名是噻唑蓝，简称MTT。活细胞，特别是增殖期的细胞可通过线粒体代谢过程中产生的琥珀酸脱氢酶的作用，使外源性淡黄色的MTT被还原为蓝紫色的结晶物甲腹并沉积在细胞中，其形成量与活细胞数呈正相关。利用DMSO或酸化异丙醇进一步溶解细胞中的紫色结晶物甲臜，在酶标仪或分光光度计下测定570nm波长处的光吸收值，可间接反映出活细胞数量的变化情况。

3．细胞的分裂指数

分裂指数是衡量体外培养细胞生长增殖状况的重要指标，常用细胞群体中分裂细胞所占的百分比来表示。分裂指数是测定细胞周期的一个重要指标，与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。同时，分裂指数也是不同实验研究选择细胞的重要依据。

4．集落形成实验

集落形成实验也称克隆形成实验，是检验细胞存活率和增殖能力的有效指标。集落或克隆是指单个细胞在体外经6代以上增殖后所形成的细胞群体，直径大小常在0.3-1.0mm。正常细胞在体外培养时由于常需附着在坚硬的玻璃或塑料表面才能生长，而转化或恶变的肿瘤细胞却常常丧失附着依赖生长的特性，可在软琼脂或甲基纤维素中以集落的方式生长。通过对集落的计数，不仅可以了解细胞的生存增殖能力，而且还可用于评价肿瘤细胞对抗肿瘤药物的敏感性、肿瘤放射生物学研究。

常用的集落形成实验主要有平板集落形成实验和软琼脂集落形成实验，此处主要介绍软琼脂集落形成实验。

5．细胞生长曲线的绘制

生长曲线是测定细胞生长基本规律的重要指标，常通过每日或隔日连续计数细胞来绘制。广泛用于比较和评价各种药物、营养条件对细胞生长的影响。

6．细胞周期的测定

细胞周期指细胞一个世代所经历的时间，即从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束所经历的时间，它反映了细胞增殖速度。测定群体细胞周期的方法很多，主要有同位素标记法、细胞计数法、流式细胞仪测定等。这里主要介绍利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU）渗入测定细胞周期的方法。

BrdU加入培养液后，可代替胸腺嘧啶核苷掺入到所复制的DNA新链中，经过一轮复制，在每条染色单体的一条DNA链均含有BrdU，但经染色后染色体却仍为深染。经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占总数的1/2，反映在中期染色体上表现为其中的一条单体浅染。但若经历了三个周期，则约一半的染色体的两条单体均浅染，另一半为一深一浅。这样，通过统计分裂相中各期的比例，就可算出细胞周期的值。