［实验器材］

1．仪器

倒置显微镜，CO2培养箱，普通冰箱，超净工作台，显微数码摄影系统，微量移液器，酶标仪。

2．材料与试剂

(1）非无菌材料酒精棉球，离心管架，血细胞计数板，记号笔。

(2)无菌材料和试剂辅料镊,96孔细胞培养板，15ml离心管，长丝滴管，l0ml刻度移液管，灭菌塑料吸嘴，MTT溶液(5mg/ml),10%BS-RPMI1640培养液，添加有0.02%EDTA的0.25％胰蛋白酶消化液，lmol/LHCl溶液，DMSO。

(3)细胞材料贴壁细胞培养物。

［操作步骤]

1．接种细胞

取对数期生长的贴壁细胞经消化、洗涤后制备的单细胞悬浮液，以一定密度接种在平底96孔细胞培养板上，每组设3个平行孔，每孔20μl。

2．培养细胞

将上述96孔细胞培养板移人细胞培养箱，在37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养。

3．呈色

至收获前4h每孔加入20μlMTT溶液（(5mg/ml)，继续孵育4h后终止培养，从每孔小心吸弃上清液100μl，再加入DMSO150μl，置酶标仪上振荡10min，以使结晶物充分溶解。

4．比色

选择570nm波长，在酶标仪上测定各孔的光吸收值，记录结果。

[注意事项］

1．设空白对照。空白对照为不加细胞只加培养液，其他步骤与实验组相同，比色时以此孔调零。

2．依据实验目的、细胞种类、细胞生长习性选择适当的细胞接种密度和培养时间长短。一般情况下，96孔细胞培养板每孔最多可以生长1×105个细胞，切不可接种密度太高，致使培养终止前细胞过满，影响实验的区分度。

3．高浓度的血清会导致实验本底增加，应尽量选择不超过10%BS的培养条件。