［实验器材]

水浴锅或可加热磁力搅拌器，低速冷冻离心机，超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，离心管，细胞培养物，长丝滴管，废液缸，10%BS-细胞液，Hank's缓冲液，酒精棉球。

[操作步骤］

1．超净工作台准备：除尘，紫外消毒30-40min。

2．37℃水浴准备：l000ml烧杯中放800ml高纯水，覆盖保鲜膜，磁力搅拌器上搅拌升至恒温。

3．从超低温冰箱或液氮罐中取出冻存管，立即放入水浴中充分摇晃，使在1min快速融化冻存液。当仅存小块冰时，继续下一步操作。

4．用酒精棉球擦洗冻存管外部以降低污染机会。无菌操作移取该细胞悬液至预先装有8-10倍体积的无菌缓冲液的盖离心管内，800-1000r/min离心6min。

5．立即小心地弃除上清，弹指法散开沉淀细胞团，加入3-5ml新鲜培养液重悬细胞。

6．将所得细胞悬液转移入培养瓶或多孔板培养孔中。静置2-5min后，显微镜下镜检细胞密度、形态、活性等，置培养箱培养。

7．过夜培养后镜检复苏细胞的活性。

[注意事项］

1．冻存液融化要迅速，时间太长容易使细胞受到DMSO的毒害。

2．洗涤的次数可适当增加，以尽可能去除冻存液成分的残留。

3．离心强度不宜过大，避免对细胞的损伤。