北京普天同创生物科技有限公司
【原理】死亡细胞或受损细胞的细胞膜通透性会发生改变,蔡黑、台盼蓝以及很多其他染料均不能透过活细胞,活细胞拒染而死细胞可以被染色,通过细胞计数的方法可以判断细胞存活率(或死亡率)。
【材料】
1.受试细胞,如胰蛋白酶消化的贴壁细胞、融化冷冻的细胞或原代离散的细胞。
2.培养液。
3.消化液0.25%胰蛋白酶。
4.D-PBSA。
5.血细胞计数板。
6.染料用D-PBSA或HB邹配制的0.4%台盼蓝或1%萘黑。
【操作步骤】
1.用胰蛋白酶消化或离心与重悬,制备高浓度的细胞悬液(约1×106个/ml)。
2.取一块干净的血细胞计数板,将盖玻片固定在适当位置上。
3.将一滴细胞悬液和一滴台盼蓝或四滴萘黑染料混匀。
4.加至血细胞计数板的计数室中。
5.静置1-2分钟(但不要放置很久,否则的话细胞会受到损伤而吸收染料)。
6.将计数板置于显微镜下,选择l0×物镜,利用网格线聚焦。
7.计数细胞总数以及着色细胞数。
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