【原理】活细胞可以摄取二乙酰荧光素，并将它水解成荧光素，所以活细胞发出绿色荧光，而死细胞则不能。死细胞可以被碘化丙啶染色，随后发出红色荧光。细胞悬液用碘化丙啶和二乙酰荧光素的混合液染色，通过计数发绿色荧光的细胞的百分数来表示活细胞数。该方法可用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

【材料】

1．单细胞悬液。

2．二乙酰荧光素，10μg/ml，溶于HBSS。

3．碘化丙啶，500μg/ml。

4．荧光显微镜。

【操作步骤】

1．细胞悬液的制备与染料排斥法相同，但是生长液中不含酚红。

2．以1:10的比例加入荧光素染料混合液，二乙酰荧光素的终浓度为1μg/ml，碘化丙啶的终浓度为50μg/ml。

3．将细胞置于37℃，温育10分钟。

4．将一滴细胞滴在载玻片上，盖上盖玻片，用荧光显微镜观察。

【结果分析】发绿色荧光的是活细胞，而发红色荧光的则是死细胞。细胞存活率可用发绿色荧光的细胞占细胞总数的百分比来表示。着色的细胞悬液也可用流式细胞仪进行分析。