北京普天同创生物科技有限公司
取50-250mL细口玻瓶,洗净并配好胶塞,用牛皮纸包好瓶口,置于120℃烘箱灭菌20min,冷却后即可用作细菌采集瓶,带采集瓶到需修复的水样中。取样时首先将牛皮纸取下,用一只手拔去瓶塞,另一只手持瓶接取或舀取水样,水样不能装满,须留一定空间存空气。取好样后立即盖好瓶塞并用牛皮纸包好瓶口,带回实验室。
在实验室将配好的细菌培养基用蒸汽灭菌15min,然后在无菌操作条件下将培养基分装于数个洗净并无菌的100mL三角瓶中,每瓶装25mL培养基,然后用洗净干燥的吸液管取1-5mL水样加到各三角瓶中,塞好棉塞放在20-35℃恒温件下静置或振荡培养7-10d。由瓶中取1mL培养液,接种到装有新培养基的三角瓶中同样培养,至少10次以上,每转移一次接种量逐渐减少,只需1-2滴就可以,在转移培养中,借助培养基的高酸度,可杀死淘汰掉一些不耐酸的杂菌。
用上述方法得到的细菌可能是不纯的,如要分离纯菌种,要做平板分离。但一般生产中使用,不需要纯菌种。菌种培养好后,要放在冰箱(<4℃)中保存,过一定时间还要取出来重新转移培养,如用加入重金属的培养基保存,可在室温条件下每4-6个月转移一次即可。
平板分离的目的是获得从单一细胞培养出来的纯菌株。方法是将固体培养基熔化倒入培养皿制成平板,然后在无菌条件下,用接种环取上述培养菌液在平板上划线,使所取菌液中的菌体细胞尽量沿划线分散开,然后将划好线的培养皿在20-35℃条件下恒温培养,经10d左右就可看到单个菌株长成的很小的菌落,挑选适当菌落用取样针移到装有数毫升培养基的小试管中恒温培养,一般培养7d左右即可。将此培养液重新在固体培养基上划线培养,如此反复数次分离与培养,就可获得纯菌株。将这些由单一菌落来的培养物分别进行鉴定,具体做法可参见《微生物手册》。
菌种驯化培养好以后,置于冰箱(<4℃)保存,但隔一段时间须重新转移培养。工业生产用菌需在专门设备中大量培养。
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