一、样品制备

污染程度低的水可以直接进行检验。污染严重的水吸取25mL样品，加入225mL缓冲蛋白胨水中，充分混匀，制成1：10样品匀液。根据情况进一步制成10倍递增的样品稀释液。

二、检验程序

水中肠球菌滤膜法检验程序见图3-16。

三、操作步骤

1.样品过滤

将灭过菌的过滤装置连接到抽滤瓶上，用无菌镊子夹取滤膜，将滤膜放至滤器底部。根据水样污染情况，选择适宜稀释度的样液。吸取1一100mL（例如加样100mL,30mL,10mL,3mL）至少选择三个加样量，至滤器内，打开真空泵进行抽滤。当全部样液通过滤膜后，用20一30mL灭菌生理盐水轻洗滤器边缘至少两次。关闭真空泵，打开滤器，用无菌镊子移取滤膜。

2.接种与培养

将已滤过样液的滤膜紧贴在SBM琼脂表面上，防止滤膜与琼脂间产生气泡，如有气泡产生，重新放置滤膜。倒置平板于（(36±0.5)℃培养（(44±4)h。肠球菌在SBM琼脂平板的滤膜上形成带有红色、栗色或品红色（粉红色）的菌落。

3.确证试验

用灭菌镊子夹取滤膜及菌落，不要反转紧贴到胆汁七叶苷琼脂（BEA琼脂）上（(44±0.5)℃培养2h。菌落周围出现褐色到黑色晕圈的为肠球菌。

4.肠球菌菌落计数与计算

计数符合上述条件菌落，生长有20^60个肠球菌的滤膜为计数合适范围。‘根据稀释情况换算单位体积水的肠球菌含量。

5.注意事项及说明

采样后应尽快进行检验，冷冻样品如不能立即进行检验，应置于-18℃保存。应冷藏保存的待检样品在运送实验室过程中应于1-4℃保存。样品采集后8h
之内要完成检验。以能在滤膜上生长出20~60个菌落为宜。