①适用范围：此方法适用于检验未经加工处理的生鲜食品及肠球菌菌数大于10CFU/g(mL）的水和食品。

②接种和培养：根据样品污染情况，选择2^-3个适宜连续稀释度的样液，分别吸取1mL稀释液，加入培养皿中，每个稀释度做两个平板。

稀释液加入培养皿后，把保持（46±1)℃的KF琼脂或肠球菌琼脂15mL倾入培养皿内，使样液与培养基充分混合。水平放置，使琼脂凝固。从制备最初稀释液结束到倾注培养基于最后一个培养皿所用时间不应超过20min。倒置平板进行培养，KF平板置（36±1)℃培养（48±2)h；肠球菌琼脂平板置（35±2)℃培养（24±2)h.

③菌落形态观察：肠球菌属细菌在KF平板上形成暗红至粉红色菌落，边缘整齐；在肠球菌琼脂平板上形成带棕色环的棕黑色菌落。用灭菌接种针从每个KF平板或肠球菌琼脂平板挑取10个典型菌落，进一步做确证实验。

④确证实验：典型菌落分别接种到BHI肉汤和BHIA斜面，BHI肉汤置（35±0.5)℃培养（24±2)h,BHIA斜面置（35±0.5)℃培养（48±2)h,BHI肉汤培养24h后，每管肉汤培养物分别接种到相应BEA平板、BHI肉汤及含6.50o氯化钠（NaCl）的BHI肉汤中。BEA平板及含6.50o氯化钠（NaCl)的BHI肉汤置（35±
0.5)℃培养（48±2)h;BHI肉汤置（45±0.5)℃培养（48±2)h，观察细菌生长情况。

BHIA斜面培养48h后，从斜面上挑取菌落做革兰氏染色。

革兰氏染色镜检为革兰氏阳性球菌；在BEA平板上生长并水解七叶昔（形成黑色或棕色沉淀）；BHI肉汤中（(45±0.5)℃生长；并且在含6.5%氯化钠（NaCl）的BHI肉汤中(35±0.5)℃生长良好；具有以上特性的典型菌落可确证为肠球菌。

⑤菌落计数：对确证为肠球菌的菌落进行平板计数，生长有30-300个肠球菌为计数合适范围。

⑥结果计算：用所选择计数的每个平板上典型肠球菌的菌落数，乘以确认为肠球菌的菌落所占比例，以此求出所选取的同一稀释度两个计数平板的肠球菌菌落数。

⑦低数值的估算：如果实验样品原液（水及液体饮料）或初始稀释悬液（其他食品）的两个琼脂平板上的菌落数均小于30个，计算两个琼脂平板上菌落数的算术平均数。

⑧大数值的估算：若所有稀释度的平板上菌落数均大于300，计数最接近300个菌落数的琼脂平板上的菌落并计算出算术平均数。其他平板可记录为多不可计。

⑨结果表述方式

a．菌落数在100以内时，按有效数字修约规则修约，采用两位有效数字报告。

b．菌落数大于或等于100时，前第3位数字采用有效数字修约规则修约后，取前2位数字，后面用。代替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按有效数字修约规则修约，采用两位有效数字。

⑩结果报告：固体样品以CFU/g为单位报告，液体样品以CFU/mL为单位报告。