①适用范围：此方法适用于污染程度低的样品，检验含有受损伤的肠球菌的加工食品及肠球菌菌数小于或等于1OCFU/g(mL）的水和食品。

②接种：根据样品污染情况，选择3个适宜连续稀释度的样液，分别吸取1mL稀释液，接种于叠氮化钠葡萄糖肉汤或肠球菌肉汤，每个稀释度加3管。接种量为1mL时，使用单料管；对于低污染样品，将lOmL最低稀释度的样品液加到等体积的双料培养基中。

③培养：接种后的肠球菌肉汤置（(35±2)℃培养（(24±2)h，肉汤颜色变为黑色的试管，表明有肠球菌生长。一般有肠球菌生长时，肉汤颜色在2h内即可变为黑色。

接种后的叠氮化钠葡萄糖肉汤置（36±1)℃培养（24±2)h，检查各试管浑浊情况。若无浑浊，继续培养至（(48±2)h后记录结果。

④确证试验：对所有呈现浑浊的叠氮化钠葡萄糖肉汤管或颜色变为黑色的肠球菌肉汤管进行确证试验。用接种环将各管的培养物划线接种于KF平板或肠球菌琼脂平板。KF平板置（36±1)℃培养（48±2)h；肠球菌琼脂平板置（35±2)℃培养（24±2)ho

肠球菌属细菌在KF平板上形成暗红至粉红色菌落，边缘整齐；在肠球菌琼脂平板上形成带棕色环的棕黑色菌落。用灭菌接种针从KF平板或肠球菌琼脂平板挑取10个可疑菌落，进行确证试验。

⑤最近似值MPN：如一管培养物中所挑取的典型菌落中，有一个菌落确认为肠球菌，则该管应视为阳性。根据接种的样品量和确证为肠球菌的阳性反应管数，查MPN值表，得出样品中肠球菌最近似值。

⑥结果报告：肠球菌MPN/g(mL)。