（一）细胞污染的预防措施

1．建立细胞库为了减少污染对细胞培养的影响，必须建立细胞冻存库。细胞冻存库应该分主细胞库（master cell bank, MCB）和工作细胞库（working cell bank, WCB )，当需要做实验时，先从主细胞库中取细胞进行复苏，然后建立工作细胞库。工作细胞库的细胞经实验研究使用后，不能再回流到主细胞库中。在细胞库里冻存每一个标本都应明确记录细胞的名称、性质、代数及有无污染。同时还应建立规范的检测程序进行“检菌”及细胞鉴定。为了保证培养细胞系的完整性，必须进行详细的实验记录，记录应包括细胞系的种类及来源、有无污染（如细菌，病毒，支原体）、细胞代数和倍增时间以及选择性突变。

2．实验室对培养细胞污染采取的预防措施

(1)针对培养细胞的污染来源采取预防措施：细胞实验室日常工作中存在着很多污染隐患，应按其污染来源采取预防措施，①取材污染：不洁的动物组织标本，很多动物组织本该是无菌的，但由于取材不小心会有污染机会，组织本身会有细菌，如取材时又不用较浓的抗生素浸泡清洗，污染的几率更大；②空气污染：空气中会有大量微生物，如果操作室与外界隔离不严或消毒不充分，很容易造成污染；如超净台使用过久，滤板未定期更换或长期不换，滤板被尘埃堵塞，或无菌室内人员走动过多，或外界气流过强等均可造成空气污染；③消毒灭菌不彻底：细胞培养用物品、材料、容器等洗刷不洁，培养用液和器材等的灭菌不彻底；④血清来源的污染：市售各种血清灭菌不彻底，潜在病毒和支原体等污染。

(2）针对操作者应采取的措施：来自操作者带来的污染常在业务素质不高和管理制度不严格的情况下发生，如操作者在进入实验室之前未仔细检查所用细胞是否被污染过，所用器材和培养液是否已经消毒灭菌过，或虽经处理过但时隔已久，未能重新处理等；操作者在试验中未能按无菌技术严格要求，如未戴帽子、口罩进行操作，培养瓶和试剂瓶的瓶口未能按要求用75％乙醇擦拭和过火焰烧灼；操作者动作不小心，操作中将吸管或无菌器具误碰到污染区域或物品；操作者在实验室里大声讲话，多次出入实验室拿实验材料等。

（二）微生物污染的排除

培养的细胞一旦被污染，应及时处理、防止造成其他细胞的污染。如果有价值的细胞被污染，当污染程度较轻时，可及时排除污染物，使细胞恢复正常。常用的排除微生物污染方法有如下几种：

1．抗生素排除法采用5～10倍于常用量的冲击法，加入高浓度抗生素后作用24～48小时，再换入常规培养物，有时可能奏效。抗生素常用量和效果列于表2-3。

2．加温除菌根据支原体不耐热的特点，可将受支原体污染的细胞置于41℃作用5～10小时（最长可达18小时）以杀灭支原体。但41℃对细胞本身也有较大影响，故在处理前，应先进行预试验，确定出最大限度杀伤支原体而对细胞影响较小的最佳处理时间。

控制支原体污染或其他生物性污染的唯一可靠的方法是所有可能污染的物品用高压蒸气灭菌法消毒。所有细胞培养设备都应消毒，应严格遵守上述的各项规章制度及监督制度，直至所有潜在的污染源都被消除。细胞一旦被支原体污染，要将它清除是非常困难的。由于一些不可复得的细胞被污染，人们不得不设法清除污染，挽救一些珍贵的细胞。事实上，经支原体污染的细胞，在污染经处理被清除后，细胞原有的许多生物学特性，如基因的表达，抗原性和代谢特点也随之发生了相应的改变。

3．动物体内接种受污染的肿瘤细胞可接种在同种动物皮下或腹腔，利用动物的免疫功能消灭污染的微生物，肿瘤细胞却能在体内继续生长，待一定时间后，从体内取出肿瘤细胞进行培养。

4．与巨噬细胞共培养巨噬细胞在体内可存活7～10天，并保持吞噬、消化微生物的能力。利用这一特点，可将少量的污染细胞与足够量的巨噬细胞共培养，从而消除污染。

5．污染纳米细菌（NB)的处理①NB污染多来自使用了污染NB的血清，所以一定要把好血清关。这一点对预防支原体污染也很有价值；②如果是贴壁细胞的话，可用无菌的PBS洗几次，可在一定程度上缓解。若是悬浮细胞的话，就不太好处理，可以向其中少加一些滋养细胞。加滋养细胞对有污染NB的刚复苏的培养细胞很有效。还要有良好的实验环境，应保持细胞实验室整个环境的洁净度。③清理无菌室所有物品，重新灭菌，用甲醛和KMn0₄熏蒸，按首次使用无菌室做，细胞重新复苏。④二甲胺四环素（minocycline）对NB具有一定的抑菌作用，可以与换液结合起来处理污染细胞。