“自杀基因”在抗肿瘤研究中的魅力在于其作用不仅仅引起转基因细胞的“自杀”，还可以通过“旁观效应”(by standing effect）作用于其邻近细胞，扩大其杀伤范围，这对恶性肿瘤的治疗尤为重要。目前，已研究的自杀基因系统有HSV-tk/GCV,CD/5-Fc,XGPRT/6-TX、VZV-tk/AraM,DeoD/MeP-dr,p-glucosidase/amygdalin等。其中在肿瘤基因治疗研究中最普遍应用的是HSV-tk/GCV酶原药物系统，该系统目前正在进行约40种临床试验。在动物模型和临床试验中，转移HSV-tk基因到原位肿瘤细胞的途径，主要是通过携带HSV-tk基因的腺病毒或反转录病毒，立体定位直接注射。本节以腺病毒介导的HSV-tk基因实验治疗膀胱癌为例介绍。

【材料】

1．实验动物5周龄Balb/C裸鼠。

2．病毒及细胞株hTERT启动子调控携带HSV-tk基因的重组腺病毒（Ad-hTERT-HSV/tk )、膀胱癌253J细胞株。

3．试剂噻唑蓝（MTT)、丙氧鸟苷（ganciclovir,GCV)。

【方法】

1．体外实验96孔板中接种膀胱癌253）细胞株细胞，每孔1x10⁴个，加入重组腺病毒(MOI=100),5% C0₂培养箱37℃培养90分钟，更换完全培养液，继续培养24小时后加入含GCV(1000 umol/L）的培养液，24～36小时后以MTT法测细胞生长存活率。

2．动物实验

(1)荷瘤裸鼠模型的建立：取体外培养的对数生长期膀胱癌细胞253J株，用0.25％的胰酶消化，离心后收集细胞。用PBS重悬，调整细胞浓度为2x10⁷/ml。取0.2ml细胞悬液接种于裸鼠右前肢腋窝皮下，每周2次测量肿瘤大小，待成瘤后选取肿瘤体积约为l00mm³的荷瘤裸鼠，经统计学检验肿瘤体积无显著性差异（P>0.05）。随机分组，第1,5,10天裸鼠尾静脉内注射滴度为5x10pfu的Ad-hTERT-HSV/tk病毒液0.l ml，腹腔注射GCV 10mg/kg,1次／天，连续15天；并设立仅注射病毒组、仅注射GCV组及空白对照组。

(2）疗效观察：①肿瘤生长抑制的观察：每4天测量肿瘤大小1次，共4周，计算肿瘤体积，根据肿瘤体积描绘生长曲线。观察结束后处死裸鼠，取瘤体称重，然后用10％甲醛固定肿瘤组织，HE染色，光镜下观察其病理变化，同时观察裸鼠心、脑、肺、肝、脾、肾等重要脏器的病理变化；②荷瘤裸鼠存活期的观察：按同样方法制作裸鼠的膀胱癌模型，按上述分组进行同样处理，记录各组裸鼠的平均存活期。

【注意事项】

1．动物个体差异较大，因此，动物实验要有足够大的样本数，另外实验分组一定要随机，减少因分组不合理造成的误差。

2．实验动物最好是雄性，避免因雌性有生理周期，增加的个体间差异。