一.IL-11活性测定

【原理】

与IL-6一样，IL-11具有广泛的生物学活性。B9-11细胞只对IL-6与IL-11刺激起反应，而对其他细胞因子均不起反应。其他细胞因子也不影响B9-11对IL-11的增殖反应。

【材料】

1．细胞株B9-11为源于小鼠B9杂交瘤的亚克隆；

2. RPMI 1640培养液；

3. MTT配制成5mg/ml贮存液过滤灭菌，4℃保存；

4. IL-11标准品；

5．抗IL-6抗体。

【方法】

1．把悬混于150u1 RPMI 1640中的5x10³个的B9-11细胞接种在平底96孔板中，加入倍比稀释的待测样品或标准品。

2．每个样品孔加入抗IL-6抗体，终浓度20ul/ml,37℃,4小时，再加入0.04mo1/L盐酸异丙醇，每孔100ul。吹打混匀后，酶标仪上540nm读取OD值。

【结果】

引起B9-11细胞最大半数增长的样本稀释孔为IL-11活性单位。参考标准IL-11量效曲线，即可得出样本浓度。

【注意事项】

试验中需加抗IL-6抗体来排除IL-6对B9-11细胞的刺激作用。

二.IL-12活性测定

【原理】

CT4S细胞为对IL-12敏感的依赖株。IL-12刺激可以使其增殖，并呈剂量依赖关系。

【材料】

1．细胞系CT4S;

2. DMEM培养基；

3. IL-12标准品；

4. ³H-TdR;

5. Hanks液。

【方法】

1．对数生长期CT4S细胞，用Hanks缓冲液洗3遍，用DMEM培养基（含6% FCS)重悬细胞，并调整细胞浓度至1x10⁵/ml。

2．将细胞悬液加入96孔培养板，100微升／孔，再加入倍比稀释的样品或IL-12标准品100ul，另每个样品孔加抗IL-4抗体，标准品孔加同等体积的培养液。每个稀释度设3个复孔，同时设阴性对照。CT4S细胞和DMEM培养液共200ul。

3．将细胞培养板置于37℃,5% C0₂孵箱中孵育56小时后，每孔加入37 kBg³H-TdR，再培养18小时，用细胞收集仪收集样品，烤干后进行液内计数，结果以每分计数表示。

【结果】

以CT4S增殖（cpm）对IL-2作标准IL-12量效曲线，两者有良好的线性关系，由此可得出样品IL-12含量。

【注意事项】

试验中应加入抗IL-4抗体以防止样品中IL-4的干扰。

三.IL-13活性测定

【原理】

B9-13是对IL-13高度敏感、依赖的细胞株，对IL-13的刺激增殖呈明显的量效关系。

【材料】

1．细胞株 来源于小鼠B9杂交瘤的亚克隆B9-13。在含IL-13的培养液中长期传代培养获得。

2. RPMI 1640培养液，含10% FCS；Hanks液。

3. MTT贮存液 浓度5mg/ml。

【方法】

1．将B9-13细胞用Hanks液洗2遍，用RPMI 1640（含10% FCS）重悬。

2．细胞37℃,5% C0₂孵育2小时。再洗涤2遍，重悬于10% RPMI 1640中，细胞浓度为10⁵/ml。

3．将待测样品或标准IL-13倍比稀释后，加入平底96孔板，100微升／孔，设3个复孔，并设对照。

4. B9-13细胞悬液105/ml加入培养板中，100微升／孔。

5．将培养板置于37℃,5% CO₂孵育68小时。

6．加入MTT贮存液10微升／孔，继续培养4小时，离心去清，加入0.04mo1/ml盐酸异丙醇，200微升／孔，吹打混匀后，在酶标仪上读取OD值。

【结果】

参考标准品量效曲线，即可得出样本IL-13浓度。

【注意事项】

B9-1-3对IL-6的刺激也有反应，故试验中应加入抗IL-6抗体以消除IL-6对试验结果的影响。