干细胞培养各环节必须遵循严格标准，以确保制备出安全、有效的干细胞制剂。临床治疗用干细胞分离、培养要求实验室的硬件条件、人员资质、标准操作程序以及干细胞制剂的质量标准等必须符合和遵守GMP原则。

1．实验室条件要求 干细胞的分离培养必须在获得省级以上疾控中心认证的优质生产规范（good manufacturing practice, GMP）实验室或优良实验室规范（good laboratory practice,GLP）实验室内完成。

GMP实验室在布局上要求人流、物流及废物通道分离（图12-1)。 GMP实验室内设有缓冲间、更衣间、准备室、无菌操作间、细胞培养室、质检室等。其中，缓冲间洁净度由十万级过渡到万级，GMP实验室整体为万级洁净度，实验室局部可达到百级洁净度，GMP实验室洁净度规定标准见表12-1。实验室内温度应保持在18～26℃，湿度保持在45％～65%。洁净室静态测试项目指标见表12-2。

2．人流与物流通道人员进入实验室要经过第一更衣室、第二更衣室、第三更衣室进行更衣，更换上无菌洁净服、戴无菌口罩与手套，然后经缓冲间进入操作室或细胞培养室。洁净服要求防静电、不脱屑。实验用品包需要经雾化乙醇表面消毒后，放入专用传递窗，经紫外线照射后移入灭菌室。在灭菌室对实验用品进行灭菌处理，凡能干烤的实验器械和用品应在160℃干烤2小时；一次性无菌耗材整包装放入环氧乙烷消毒柜熏蒸；其他物品用103 kPa (121.3℃）高压蒸气灭菌20分钟。实验用品灭菌后经传递窗传入准备室，再由准备室移入操作间和细胞培养室。实验废弃物在专用传递窗内经紫外线照射后移入废物通道，从废物通道传出（见图12-1 GMP实验室结构是大连大学中山医院中心实验室提供）。

3. GMP实验室工作人员的资质要求GMP实验室工作人员应具有细胞生物学、免疫学、医药或生物学相关专业的学习及GMP训练经历，硕士以上学历，具备严谨的科学作风，熟悉GMP规则，能够严格履行自我职责。具备完成所承担的工作所需要的知识。工作人员要通过专门培训方可上岗。

4. GMP实验室的维护GMP实验室要定期维护。初效、中效过滤器需要6个月更换1次，高效过滤器需要每年更换1次。每次使用实验室的前后都要进行臭氧灭菌20分钟，净化工作台在使用前后要用紫外线照射20分钟。此外实验室与仪器的清洗和消毒要每周进行2次，方法是75％的雾化乙醇喷洒后，用无菌无屑纸巾擦拭，清洗、消毒范围包括棚顶、墙面、地面、台面和室内的仪器设备等。同时对仪器要定期维护和校正。

5．记录与文件建立健全标准操作规程和完善各种记录，干细胞采集、分离、培养、收获、质检，以及仪器设备的使用、检查、测试、保养、校正及故障修理等各项工作，都要有标准操作规程。各种标准操作规程必须既要具体、符合实际，又要容易执行。标准操作规程文件的内容至少包括题目名称、编号、正文、参考文献、修订号码、制定者、审定者、批准者、批准日期、页码与总页数等。

实验实施过程、仪器设备的使用、检查、测试、校正、故障修理及操作人员姓名应作详细记录。试剂、药品国药准字文号、厂家与生产批号、经销公司名称及经办人等都应作详细登记，以确保药品与试剂能够溯源。

6．质量控制质量检测应由第三方完成，质检人员不参加实验过程，质量检测是细胞制剂安全性和有效性的重要保证。质检内容应包括：细胞总数、干细胞纯度、分化细胞率及活细胞率的检测，以及细菌、内毒素、支原体等病原微生物的检测。

7．干细胞的临床应用应注意的问题

(1)开展干细胞的临床应用研究必须遵守国际干细胞研究学会《干细胞临床转化指南》，必须遵守我国有关干细胞研究的伦理准则和相关指南或管理规定。

(2）按规定程序进行临床应用研究项目或第三类医疗技术申报，获批后方可进行临床科研工作或开展医疗技术活动。

(3）临床研究方案必须得到临床试验实施者所在医疗或研究机构伦理委员会的批准。

(4)在实施临床试验前，必须向自愿参加临床试验的患者告知临床试验的内容、可能的获益及潜在的危害，并获得患者签署的知情同意书。

(5）临床研究不得向参加试验的患者收取与临床试验相关的费用。

(6）临床试验要采用科学、客观的研究设计，评价干细胞治疗有效性和安全性，特别是长期的有效性和安全性。

8．干细胞的治疗流程

(1)治疗申请：医师认为患者有必要接受干细胞治疗，在征得患者及家属同意后，请患者及家属阅读《知情同意书》并签字。《知情同意书》第一联由患者保留，第二联（签字联）由医师存档保留。

(2）治疗前准备：主治医师填写《干细胞治疗申请单》与实验室联系预约干细胞采集时间。申请单尽可能填写详细，以便于细胞培养技师了解患者自然状况和病情。

(3)干细胞采集准备：采集前一天需对患者进行血常规和出凝血时间检测，并于采集前24小时注射1～2支集落刺激因子。如患者为乙肝、丙肝、梅毒或HIV携带者，应告知实验室，便于细胞培养技师进行防护。

(4)干细胞采集：患者采血前应进食清淡食物，并避免大量饮水。采血前医生核对医嘱，在干细胞采集登记表上填写各项患者信息（姓名、性别、年龄、科室、住院号、床号等）。采血时先核对患者姓名，向患者说明采血目的及配合方法。再次核对患者信息，并协助患者取合适体位。然后进行外周血干细胞或骨髓干细胞的采集。

(5）干细胞移植：于移植的前一日，实验室出具《移植通知单》并电话通知，《移植通知单》医师签字后，第一联由医生保存，复写联由实验室保存。医生下医嘱，病房护士提前一天通知患者进行移植。干细胞送至病房或手术室后，护士确认患者信息无误后，与运送人员做好交接并签字。干细胞应立即移植，如有特殊原因不能立即回输的应放入4℃冷藏，时间不得超过两小时。