一、实验目的

    掌握HPLC测定大米中甲萘威残留量的原理与方法。

    二、实验原理

    大米中的甲萘威残留经提取、净化、浓缩、定容后，以高效液相色谱仪分离，紫外检测器于280nm处检测吸光度。与标准品比较，根据保留时间定性，以峰高定量。

    三、仪器与试材

    1．仪器与器材

    高效液相色谱仪(带紫外检测器)、粉碎机、振荡器、超声波发生器、旋转蒸发仪。

    2．试剂

    除特别注明外，实验中所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。

    (1)常规试剂：苯、乙腈、甲醇、CH₂Cl₂、无水Na₂SO₄(120℃干燥4h)

    (2)弗罗里硅土：于120℃干燥4h，加入弗罗里硅土质量6％的水，摇匀，过夜后使用。

    (3)甲萘威标准溶液：称取甲萘威标准品(纯度大于99％)，以甲醇溶解并配制成l0.0mg／mL的标准储备液，保存于4℃冰箱中。使用时以甲醇稀释成10μg／mL的标准使用液。

    3．实验材料

    2～3种大米，各200g。    

    四、实验步骤

    1．样品提取

    (1)取100g大米样品，粉碎后过20目筛。

    (2)称取20.0g米粉于250mL具塞锥形瓶中，加入50mL苯，浸泡过夜。

    (3)振荡1 h后，过滤，滤液以苯定容至50mL。

    2．样品净化

    (1)取直径为1.5cm色谱柱，先装脱脂棉少许。柱两头装高2cm的无水Na2SO4，中问装6g弗罗里硅土。

    (2)装好的柱先用20mL CH₂Cl₂预洗，弃去预洗液，然后将5mL样品提取液倒入色谱柱中。

    (3)用70mL CH₂Cl₂少量多次淋洗，收集全部淋洗液，于30℃水浴中浓缩至近干，以甲醇溶解残余物，并定容至5mL。

    3．测定

    (1)取10μL经0.45μm滤膜过滤后的样品净化液和标准使用液，分别注入高效液相色谱仪中进行分离、检测。

    (2)以标准使用液的农药质量为横坐标，峰高为纵坐标，绘制标准曲线。从标准曲线上查出样品提取液中农药残留的质量。

    (3)参考色谱条件：色谱柱为μ一Bondpak C₁₈不锈钢柱(3.9mm×3.0cm)；检测器为紫外检测一器(检测波长为280nm，灵敏度为0.01～0.02)；流动相为乙腈一水混合溶液(55+45，体积比)溶液，流速为1mL／min；柱温为室温。

    4．计算    

    大米样品中甲萘威的含量按下式计算：

    x=mV₁/m₀V₂

    式中，z为大米样品中甲萘威的含量，mg／kg；m为样品提取液中甲萘威的含量，μg；V₁为样品提取液的体积，mL；V₂为色谱进样的体积，mL；m₀为样品的质量，g。

    五、注意事项

    1．实验步骤中的色谱条件仅供参考，具体的分析条件应该根据所用气相色谱仪的型号，参考说明书中的条件进行。

    2．样品净化过程中，上样于净化柱中的样品提取液的体积可以根据样品中农药残留量进行调整，5～10mL均可。

    六、思考题

    1．试比较采用HPLC和GC测定食品中甲萘威残留量的优缺点。

    2．叙述你在实验中采用的HPLC仪的型号、各部件的名称和功能。