一、物理计数

1．计数器测定法即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细菌悬液置于细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的（0.1 mm³)，因而可根据计数器刻度内的细菌数计算样品中的细菌数量。本法简便易行，可立即得出结果。

2．电子计数器计数法电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，白动记录在电子记录装置上。该法测定结果较准确，但只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何其他碎片。

3．比浊法比浊法是根据菌悬液的透光度间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与吸光度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用吸光度表示样品中菌液浓度。此法简便快捷，能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目。

4．测定细胞重量法 此法分为湿重法和干重法。湿重法是指单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法是指单位体积培养物经离心后，以清水洗净放入干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。

二、生物计数

生物计数法即活细胞计数法。常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液与融化好的培养基进行平板倾注培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是目前国际上所采用的检测活菌数的常用方法。生物计数法广泛应用于尿液、水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验。

注意事项如下。

①一般选取菌落数在3～30。之间的平板进行计数，过多或过少均不准确。

②为了防止菌落蔓延而影响计数，可在培养基中加入0.001％2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC)。

③本法限用于形成菌落的微生物。

1．菌落总数菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度后与培养基进行混合，在一定培养条件下，每个细菌都可以在平板上形成一个可见的菌落。菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH值、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的菌落总数。如在需氧情况下，37℃培养48 h，能在普通营养琼脂平板上生长的菌落总数。所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以生长繁殖。因此，菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，另外，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以也称为杂菌数或需氧菌数等。菌落总数测定常用于判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。

2．检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1 mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48 h)，记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每毫升）原始样品中所含细菌菌落总数。

3．倾注培养检验方法

(1)操作方法：根据标准要求或对标本情况进行估计进行适宜比例的稀释，用吸管吸取1 mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。将凉至46℃的营养琼脂培养基注入平皿约15 ML，并转动平皿混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入已加1 mL无菌生理盐水的灭菌平皿内作对照。待琼脂凝固后，翻转平板，置35℃孵箱内培养18～24 h，计算平板内菌落数目，再乘以稀释倍数，即得出每毫升（每克）样品所含细菌的数量。

(2)注意事项：倾注用培养基应在46℃水浴内保温，温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易于凝固而不能与菌液充分混匀。如无水浴，应以皮肤感受较热而不烫为宜。倾注培养基的量规定不一，从12～20 mL不等，一般以15 mL较为适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易千裂。倾注时培基底部如有沉淀物，应将其弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。为使菌落能在平板上均匀分布，标本加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正、反两个方向旋转，标本从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20 min，以防止细菌死亡或繁殖。培养温度一般为35℃。培养时间一般为48 h，培养箱应保持一定的湿度，培养48 h后培养基失重不应超过15%。