北京普天同创生物科技有限公司
恙虫病东方体(Orientia.tsutsztgamushi,Ot)是恙虫病的病原体。1927年日本学者将患者血液注射于家兔睾丸内,经5~6次传代后,取其涂片染色发现了该病原体,命名为东方立克次体,1931年正式定名为恙虫病立克次体(R.tsutsugamushi),最新归于东方体属。
一、生物学特性
1.形态结构 具有多形性,但以球杆状或短杆状多见。大小为(0.5~1.5)um×(0.2~0.6)um。恙虫病东方体的细胞壁缺乏肽聚糖和脂多糖,细胞壁内层比外层薄。革兰染色阴性,Giemsa染色呈紫色,Gimenez染色呈暗红色(其他立克次体呈红色),Macchiavello染色呈蓝色(其他立克次体为红色)。恙虫病东方体在感染细胞内多密集分布于胞质内近核旁。
2.培养特性 严格细胞内寄生,在敏感动物体内、鸡胚卵黄囊以及组织培养的细胞内均可生长、繁殖。小鼠对恙虫病东方体最敏感;常用原代细胞有地鼠肾细胞和睾丸细胞等,传代细胞有非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)、小鼠成纤维细胞(L929细胞)等。
3.抗原结构 具有耐热多糖抗原和特异性抗原。在外一斐反应中,恙虫病患者的血清能与变形杆菌OXk抗原产生强凝集反应,不与OX19和OX2抗原凝集。
4.基因组 基因组DNA含有(1.6~2.0)×106 bp, G+C的摩尔分数为35%。
5.抵抗力 在外界环境中的抵抗力较其他立克次体弱。56℃ 10 min即可死亡,37℃ 2~3 h其活力大为下降,低温可长期保存,-20℃存活5周。对一般消毒剂非常敏感。
二、临床意义
恙虫病的疫区主要分布于东南亚、西南太平洋岛屿、日本以及我国的东南和西南地区,我国东北和华北等也报道有该病的流行。恙虫病为自然疫源性疾病,主要流行于啮齿类动物。野鼠和家鼠感染后多无症状,但病原体可在其体内长期保留,为该病的主要传染源。
恙螨既是传播媒介又是储存宿主,立克次体由恙螨幼虫叮咬而侵入人体。
人被感染了恙虫病东方体的恙螨幼虫叮咬后,立克次体由叮咬部位侵入人体,在局部繁殖后入血,随血流到达全身各组织器官,主要在小血管内皮细胞中增殖,引起血管栓塞。立克次体死亡后释放的毒素样物质是主要致病因素,可引起发热、头痛等全身中毒症状及各组织脏器血管炎。恙虫病的潜伏期为10~14天,多突然起病,发热可达39℃以上。临床表现除高热外尚有皮疹、皮肤焦痂与溃疡、淋巴结肿大、肝脾肿大等,危重病例可呈严重的多器官损害,如肝炎、肺炎、心脏病变、肾功能衰竭、循环衰竭与出血现象等,少数病例还可发生DIC和脑炎。
三、微生物学检查
(一)标本直接检查
1.抗原检测 通常采用ELISA间接法检测标本的特异性抗原。
2.核酸检测 根据恙虫病东方体主要外膜蛋白抗原基因设计的引物,对来自患者、动物或恙螨的DNA样品进行PCR、巢式PCR或PCR/RFLP,进行基因诊断、分型,判断恙虫病疫源地以及流行趋势。巢式PCR法的敏感性较PCR法高100倍,可以检出200pg的恙虫病东方体DNA,是目前最为快速、特异、敏感的实验室诊断方法。
(三)分离培养与鉴定
1.动物接种取急性期患者的血液(晚期病例多将血块制备成悬液),选择4~8只小鼠,腹腔接种标本0.5~1.0 mL/只。逐日观察,若出现发病症状,于小鼠濒死前或死亡不久时解剖,可见肝、脾肿大,皮下淋巴结肿大充血,或兼有黏稠的腹腔渗出液。取腹腔积液和腹膜涂片,或肝、脾印片,经Giemsa染色或免疫荧光染色镜检,并作进一步鉴定。Giemsa染色可见单核细胞胞浆内有数量较多,呈双、短杆状或球杆状、紫红色的立克次体。免疫荧光法检查,涂片中可见大量特异性的荧光颗粒。
2.鸡胚接种鸡胚接种主要用于分离株的大量繁殖以制备抗原,或长期保藏菌种。将发病小鼠的腹腔积液作适当稀释,接种鸡胚卵黄囊,35℃孵育,收集5天以上濒死的鸡胚卵黄囊膜涂片,Giemsa染色或免疫荧光染色镜检,并作进一步鉴定。通常-70℃保存卵黄膜以制备抗原。
3.细胞培养近年来国内外多采用L929细胞或Vero细胞进行分离培养。培养时间10~15天,取细胞涂片,Giemsa染色或免疫荧光染色镜检,并作进一步鉴定。
通话对您免费,请放心接听
温馨提示:
1.手机直接输入,座机前请加区号 如18601949136,010-58103629
2.我们将根据您提供的电话号码,立即回电,请注意接听
3.因为您是被叫方,通话对您免费,请放心接听
登录后才可以评论