人们一般所讲的分离系统主要指色谱柱及其附件，它是一个非常重要、非常复杂的部分。一般色谱柱的结构如图2-21所示；它包括柱管(大多采用不锈钢制作)、填料(后面将详细讨论)、接头(一般用不锈钢制作)、卡套(一般用不锈钢制作)、压帽、密封环、滤片、螺丝(一般用不锈钢制作)、连接管道(一般用不锈钢制作)等。

(1)HPLC的色谱柱主体组成(结构)。HPLC的色谱柱主体组成一般如图2-21所示。

1-色谱柱的塑料保护头；2-柱头螺丝；3-刃环；4-密封环；

5-滤片(筛板)；6-柱体(不锈钢管)；7-色谱柱填料

图2-21 一般色谱柱的组成

色谱柱的筛板(过滤板)一般是用不锈钢或钛合金材料制作，其孔径一般在0.2～20um，孔径大小主要取决于柱填料的粒度，它是一个非常重要的零件，可以防止填料漏出。同时，可防止色谱柱工作时杂质进入柱内引起分离效果下降，甚至容易引起色谱柱堵塞等。色谱柱与输液管连接处一般需要使用不锈钢制作的卡套和不锈钢制作的固紧接头螺钉，它们也非常重要，否则色谱柱系统会漏液，从而使柱压下降、流动相或样品漏出，严重影响分析测试结果，甚至不能进行分析测试工作。

色谱柱可以分为制备型和分析型两大类，一般分析型的柱使用最多。如果细分，色谱柱又可以分为常规柱、窄径柱、毛细管柱、制备柱和半制备柱等。为提离分析速度，有人经常使用短柱，其柱长5～10cm,填料粒径多为3um左右。很多分析工作者比较强调分析灵敏度，因此发展了窄径柱、毛细管柱和微径柱。这些柱子的优点是：所需样品少、所需流动相少、灵敏度高、容易控制温度。但是它们对检测器的流动池、柱外的管道、接头、进样阀等的要求大大提高了。

色谱柱的柱效是最重要的关键指标，一般都取决于固定相的性能和装柱技术。一般HPLC的色谱柱固定相(填料)大致有三种：硅胶或以硅胶为基质质的填料、聚合物填料和无机物填料。正相色谱柱大多采用硅胶类填料，反相色谱柱则多采用以硅胶为基质组成的官能团类的填料。以聚合物为填料的色谱柱最大的特点是pH在1～14都能用；疏水性强。但无机填料色谱柱一般只是限于特殊用途，比较少用。

因为HPLC的样品都为溶液，而溶液受温度影响很大。例如：温度对溶剂的溶解能力、色谱柱的柱效、流动相的黏度都会产生影响；如果温度升高，可能会提高溶液在流动相中的溶解度，可以降低分配系数K；降低流动相黏度可以降低柱压，有利于保护色谱柱，延长色谱柱的寿命。但是，温度不能太高，否则会产生气泡。

HPLC工作者还必须注意不同的温度，对色谱柱的保留时间、分离效果会有影响；对检测器的灵敏度也会有影响。特别是对示差折光器的灵敏度、最小检出限的影响很大。所以，很多HPLC特别注意对恒温系统的设计。这些都是HPLC设计者、使用者应该重视的问题。

作者的长期实践证明：色谱柱的技术含量很高，它除了与色谱柱的结构有关外，更加重要的还与固定相的性能有关，又与装柱时的填充料和填充技术有关。有些使用者根据使用要求自己装色谱柱，大多数使用者都是使用已经装好的商品色谱柱。不管是哪种柱，在使用前一定要对色谱柱进行认真的考查；使用期间或放置一段时间后，也要重新检查、测试。目前国内很多HPLC使用者对这个问题很不了解或很不重视，他们以为买来的色谱柱，一定就是合格的、好用的色谱柱，并不知道它还有与系统是否相匹配的问题；不知遭它会对前面的高压泵、后面的检测器有什么影响等。所以在使用过程中，总是磕磕碰碰，不能得到最佳的分析结果。

(2)色谱柱的性能指标。色谱柱的性能指标包括填充料的粒径、柱的长短和内径、色谱柱耐压的大小、理论塔板数、对称因子、容量因子等的重复性(分散度)等；色谱柱使用时的相关指标有流动相的组分和pH、流动相的流速、环境温度、样品等；在一般情况下，选择因子或容，因子的重复性在±10％或±5％以内为好。

一般商品色谱柱应该给出柱长、内径、填料类型、填料的粒度、色谱柱的柱效、不对称度、柱压降，同时给出在一定条件下、对某种样品(如萘或蒽)的测试谱图等。但是一定要在使用条件下测试时的谱图和数据，特别是应该给出样品浓度和检测器的量程。

(3)色谱柱的分类

HPLC的色谱柱(分离柱)是极其重要的部件之一，一般可分为反相柱、正相柱、其他柱三类。

①反相色谱柱：它是使用最多的一种色谱柱；一般约占70％；其中，C18柱约占65％；C8柱占15％左右；苯基柱＜5％。反相色谱是目前应用得最为广泛的一种高效液相色谱方法。C18在反相色谱中应用得最为广泛。大概超过一半。

②正相色谱柱：正相色谱柱也经常被使用，它约占20％。

③其他色谱柱(手性柱、离子交换柱)：约占10％。

要用好、保护好色谱柱，是一个需要特别重视的问题，如果稍有不慎，就有可能降低色谱柱的柱效、缩短色谱柱的寿命，甚至损坏色谱柱，下面介绍用好色谱柱的关键。

(4)用好色谱柱的关键。根据作者的实践，使用者在使用色谱柱时应该特别注意以下几点。

①经常冲洗色谱柱。每次使用后，必须用强溶剂冲洗30分钟左右，或者冲洗床体积(柱体积)的20倍左右。

②色谱柱较长时间不使用时，应该对色谱柱充满甲醇或乙腈，最后浸泡在甲醇中；作者一般是将长期不用的色谱柱浸泡在甲醇中，效果很好。

③柱头必须拧紧，不许有任何缓冲液留在色谱柱内。

④在改变溶剂的组成时，有机溶剂和水之间的切换应该缓慢进行，如果快速变换，有可能损坏色谱柱。

⑤对于复杂体系的样品(如生物样品、中药样品)一定要进行预处理，或者在色谱柱和进样器之间加入保护柱。

⑥不能对一般色谱柱进行反冲洗，否则将迅速降低色谱柱效；但是，色谱柱的生产者指明该色谱柱可以反冲洗时例外。

⑦色谱柱不能受到强烈的机械振动；不能在压力和温度急剧变化的情况下使用，否则色谱柱内的填料会受到影晌。