(3)一种优质的双光路双流路紫外/荧光检测器(UV/FLD-1)。FLD是除UVD外使用最多的检测器，占整个HPLC检测器覆盖面的15％。从仪器学理论来看，它是一种高灵敏度的HPLC检测器；因为它可以在光电转换器处在暗背景的状况下，对被测样品发射出的比入射光波长长的荧光进行检测。所以，其灵敏度要比UVD高1000倍。特别是，凡是有苯环的物质，都伴随着荧光，也是致癌物质；目前国内外对致癌物质的检测，大多采用FLD检测(如黄曲霉素,3、4苯并芘等强致癌物质的检测)。

OUV/FLD-1的光路图。图2-61是作者研发的一种新型UV/FLD-1双光路双流路紫外/荧光检测器的光路示意图。

图2-61UV/FLD-1型双光路双流路紫外/荧光检测器光路图

②2 UV/FLD的工作原理：将从单色器射出的单色光，通过一个半透半反的光束分列器后，一束光直接进入样品流动池，另一束光进入参比流动池。在样品路和参比路的光束前进方向检测紫外吸收，在其90^o方向检测荧光。由于该检测器的光学、电子学方面的设计，都有独到之处，所以该项目获得了国家发明奖。至今国外还未见报道过此类检测器。它具有灵敏度高、稳定可靠、一机多用的特点；只需要8uL样品，就可以一次同时分开样品中发荧光和不发荧光的组分。

③ UV/FLD的主要性能技术指标如下。

a.紫外分光部分。

波长范围：200～600nm，连续可调

开机平衡稳定时间：<20分钟

基线漂移：C4.0×10^-4 AU/h(开机半小时后测量)

噪声：＜±2.5×10^-4 AU/h(开机半小时后，任意10分钟内的有效值)

灵敏度：0.011 AUFS(采用美国ASTM标准方法测量)

线性：±1.8％(测试波长254nm)

线性动态范围： 3.25×10³

b.荧光部分。

波长范围：激发波长Ex为200～389nm，连续可调

荧光发射波长：Em为240～800nm(总荧光量)

开机平衡稳定时间：<15分钟

基线漂移：<1.5mV/h(开机半小时后测量)

噪声：±0.05mv(开机半小时后，任意10分钟内的有效值)

灵敏度：9.6×10^-11g(硫酸奎宁溶解在0.1N的硫酸中)

线性：±1000(测试波长254nm)

线性动态范围：2.0×10³

UV/FLD-1双光路双流路紫外/荧光检测器于1985年研制成功，1986年由原南京分析仪器厂投产，1988年获得国家发明奖。至今未见国内外报道同类仪器。

④应用实例。该检测器从1984年开始，由中国科学院上海有机化学研究所的徐杰诚教授和陆缊华教授将其用于多肽、氨基酸、吡咯开环反应、二肽甜味剂等研究工作；中国人民解放军南京军区总医院用它进行过多种氨基酸的检测，并用来开展临床服务工作，初步测试过抗忧郁药阿米替林、降压药烟浪丁等，都得到了满意的结果。本文仅举几例说明之。

a．对L-色氮酸的定量分析。

分析条件：色谱柱：YWG C18(5um)；4.60×300mm；流动相：74％乙腈+26%醋酸盐缓冲液；流速：0.6mL/min；柱压力：9400MPa；检测器量程：UV: 0.1 AUFS,FL×1；波长220nm；光电倍增管高压480V；氘灯恒流电流300mA；记录仪：UV×5mV；纸速：4mm/min；样品：L-色氨酸(浓度c= 2.1×10^-5 g/mL)；进样R: 20uL；参比池充满流动相。测试结果：最小检测浓度为3.0×10^-10 g/mL；测试图谱如图2-62所示。

图2-62 L-色氮酸的定量分析色谱图

b．多肽化合物的分离检测。

分析条件：色谱柱：ODS(Cl8)，4.6×300mm；流动相：乙腈：醋酸铵= 20：80；流速：1.05mL/min；量程：UV：0.1AUFS，FL×1；波长210nm；负高压750V；氘灯恒流电流300mA；记录仪：UV×100mV；FL×5mV；纸速：4mm/min；样品：L-亮氨酸、D-亮氨酸和丝氨酸混合物；三种氨基酸都溶解在移动相中，L-亮氨酸浓度c=1.1×10^-4 g/mL；D-亮氨酸浓度c=4.5×10^-5 g/mL；色氨酸浓度c=3.6×10^-5 g/mL；三者的混合为1：1：1；进样量：10uL；参比池充满移动相。

多肽化合物的检测结果如图2-63所示。

图2-63 多肽化合物的分离检测

c.苯、萘、联苯混合物的定性分析。

分析条件：色谱柱：ODS(C18)，4.6×200mm；流动相：甲醇：水=80：20；流速：1.0mL/min；柱压力：100kg/cm²；样品：笨、萘、联笨混合物，浓度为每mL甲醇中含苯1.0uL，萘0.5mg、联苯0.9mg；进样量：3uL；参比池充满移动相：UV×1(0.01 AUFS)，FL×1；波长：254nm；负高压：525V；氘灯电流：250mA；记录仪：UV×20mV；FL×10mV，纸速：4mm/min。

三种混合物分析测试结果如图2-64所示。

图2-64 苯、萘、联苯混合物的定性分析

d．本检测器还可以单独作为微量紫外可见光分光光度计和激发光分光微量荧光计使用；一次微量进样后能得到试样对某一单色光的紫外吸收、荧光激发波长和总荧光，三个物理量。

本检测器可以方便地鉴别对某一波长既有紫外吸收又有荧光发射的物质A、只有紫外吸收而无荧光发射的物质B以及只有荧光发射而无紫外吸收的物质C。对A、B和C三种物质的检测，可以得到图2-65所示的结果。

图2-65 发荧光和不发荧光样品的测试结果

相关链接：HPLC几种最常用的主要检测器（二）