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(4)目前使用最多的几种非选择性(通用性)HPLC检测器。
①示差折光检测器(RID)。示差折光检测器在20年前是一种使用最多的非选择性检测器;它是一种利用物质的折射率变化,来做定性或定量测量的仪器。图2-66是一种典型的示差折光检测器。
1-微调器;2-粗调器;3-池棱镜;4-参比溶液;5-样品;6-检测池;7-透镜;8-光检测器(光接收器)
图2-66 反射式折光仪光路图
②蒸发光散射检测器(ELSD)。ELSD是目前HPLC中使用最广泛的一种非选择性的通用型检测器。我国2010版药典中非常重视它的应用。我国上海通微公司近几年推出了一种UM5000型ELSD,已经销售100多台,深受广大用户欢迎。下面简单介绍UM5000型ELSD的有关情况。
a.国产UM 5000型ELSD工作原理:UM 5000型ELSD是我国“+五”国家科技攻关计划重大项目研发成果,是我国首台国产化的ELSD,其性能指标达到国际同类产品先进水平。它可检测挥发性低于流动相的任何样品,而不需要样品含有发色基团。ELSD的灵敏度比示差折光检测器高,对温度变化不敏感,基线稳定,适合干梯度洗脱液相色谱联用。
UM 5000型ELSD的外形如图2-67所示。
图2-67 UM 5000型ELSD的外形图
雾化原理为液体流动相在载气压力的作用下在雾化室内转变成细小的液滴,从而使溶剂更易于蒸发。液滴的大小和均匀性是保证检测器的灵敏度和重复性的重要因素。
UM5000型蒸发光散射检测器,通过对气压和温度的精确控制,确保在雾化室内形成一个较窄的液滴尺寸分布,使液滴蒸发所需要的温度大大降低。
蒸发原理为载气把液滴从雾化室运送到漂移管进行蒸发。在漂移管中,溶剂被除去,留下微粒或纯溶质的小滴。UM5000型ELSD采用低温蒸发模式,维持了颗粒的均匀性,对半挥发性物质和热敏性化合物同样具有较好的灵敏度。
检测:光源采用650nm激光,溶质颗粒从漂移管出来后进入光检测池,并穿过激光光束。被溶质颗粒散射的光通过光电倍增管进行收集。溶质颗粒在进入光检测池时被辅助载气所包封,避免溶质在检测池内的分散和沉淀在壁上,极大地增强了检测灵敏度并极大地降低了检测池表面的污染。
UM5000型ELSD的结构如图2-68所示。
图2-68 UM5000型ELSD的结构图
b. UM5000型ELSD的主要关键技术指标。
环境条件室温-40℃;相对湿度<90%
蒸发温度范围室温-130℃
温度调节增量1℃
温度控制准确度±1℃
气体要求氮气或空气
气体输入压力范围2~5bar
气体压力检测精度0.01 bar
气体流量范围 1~4L/min
气体流量准确度0.02L/min
液体流量范围0.01~3mL/min
检测光源650nm激光二极管
检测元件光电倍增管
基线噪声<0.05mV(流速1mL/min)
基线漂移<0.5mV/h(流速1 mL/min)
最低检测限<1ng(葡萄糖,直接进样)
典型定量范围0.1~30ug(葡萄糖)
定量重复性 RSD6<2%(葡萄糖,流速1 mL/min)
信号输出0~lVDC
检测角度120o
计算机接口RS232
c. UM 5000型ELSD的主要特点如下。
第一,可检测挥发性低于流动相的任何样品;
第二,流动相低温雾化和蒸发,对热不稳定和半挥发性化合物亦有较高灵敏度;
第三,广泛的梯度和溶剂兼容性,无溶剂峰干扰;
第四,辅助载气提高了检测灵敏度,保持检测池内的清洁,避免污染;
第五,高精度温度控制,保证高精度检测;
第六,可与任何HPLC系统连接。
相关链接:HPLC几种最常用的主要检测器(三)
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