1.研发者和使用者都应该从仪器学理论高度，重视色谱柱本身及色谱柱的柱外效应等有关问题

1.1色谱峰拖尾问题

色谱峰拖尾是一个非常常见的实际问题，也是很多HPLC使用者最感到头疼的问题。色谱峰拖尾可能引起分析检测的数据不准确，严重影响HPLC使用者的工作质量。色谱峰拖尾与色谱柱、流动相的流速、流动相的pH、试样本身的杂质等问题有关。HPLC使用者一旦发现峰拖尾的问题，一定要认真查找原因、认真解决，否则不可能得到准确可靠的HPLC分析数据。峰拖尾问题应该从色谱柱的理论上去找原因，其中包括色谱柱填料的类型、极性，流动相的组成、pH的影响等。

1.2如何延长色谱柱的寿命

HPLC的使用者一般都会特别重视对色谱柱的保养。因为色谱柱一般都很容易损坏，所以使用过程中，对其保养很重要。一般来讲，每次使用后要认真洗柱，应该严格遵守洗柱时间或洗柱所用的溶剂量：一般经常使用的HPLC色谱柱，每天下班前应该用甲醇冲洗45分钟或用20倍床体积的甲醇冲洗一次；长期不用的HPLC色谱柱，需要用甲醇浸泡着，并且加盖密封。

1.3必须注意对“柱外效应”的控制

所谓“柱外效应”，就是指HPLC系统中，除柱本身以外的管路、连接件、进样器和流动池的死体积等引起的色谱峰增宽效应。这些部分对HPLC的使用者来讲，是一个非常重要而且非常复杂的问题，它会直接影响HPLC仪器得到的数据的可靠性。例如，如果HPLC系统中有某处(管路、连接件、流动池等)漏液，就会使高压泵的压力下降或不稳定，就会使整个HPLC系统的稳定性变坏(RSD变坏)，就不可能得到好的分析测试结果。

2. 研发HPLC高压泵和使用高压泵的关键问题

从仪器学理论来讲，对整个HPLC系统来讲，HPLC的高压泵是一个非常重要的关键部件之一，它与色谱柱、检测器有密切的关系。当高压泵确定后，它对后面的色谱柱就会有很多要求(长度、填料等)，否则组成HPLC系统后，系统很难正常工作。检测器和色谱柱确定后，它对前面的高压泵也有很多要求(压力、流量、稳定性等)。高压泵、色谱柱、检测器三者既相互关联，又相互制约。高压泵的研发者和使用者只有全面考虑整个HPLC系统的各个部件，才有可能研发出优质的HPLC系统或用好HPLC，或者说才能将HPLC用到最佳状态，才能得到最佳的分析测试数据。

3. 色谱柱质量的判断

HPLC色谱柱的性能指标很多，一般包括在一定实验条件下(样品、流动相、流速、温度等)的柱压、塔板数、对称因子、容量因子和选择性因子的重复性或离散度。色谱柱的评价报告应该包括柱的基本参数(长度、内径、填料种类、粒度直径、柱效、不对称度、柱压降等)色谱柱的质量好坏，直接影响HPLC对样品分析测试结果(数据)的可靠性，所以HPLC的研发者和使用者应该了解有关的色谱柱理论、指标，特别应该注重对色谱柱质量的判断。如果色谱柱质量下降到一定程度，就必须报废、更换新色谱柱。以下问题值得使用者特别注意。

3.1色谱柱的柱效

决定相邻组分分离好坏的主要因素有：第一，两个组分的保留值之差，也就是色谱柱内迁移速率的差异；它取决于各组分与固定相、流动相的相互作用的差异。第二，组分的峰宽反映组分区带在移动过程中的扩张程度，很大程度上取决于色谱的分离条件。

在考虑色谱柱的分离柱效时，要特别注意以下几个问题。

第一，决定组分保留值的分配系数。分配系数K=溶质在固定相中的浓度/溶质在流动相中的浓度。K值小的组分在固定相中浓度小，所以容易随流动相运动而较早出峰，反则反之。

第二，决定组分保留值的分配比k(容量因子)。k＝组分在固定相中的量/组分在流动相中的量。

第三，选择性因子a(又叫相对保留值γ)。即后出峰的组分的调整保留时间与先出峰的组分的调整保留时间的比值。
因为组分在色谱柱内移动时，会逐步产生扩散，不利于分离，影响色谱柱的分离效率(柱效)，所以塔板数高者好。使用过程中，当塔板数降到一定程度时该柱就报废了。

3.2HPLC色谱柱的清洗

HPLC色谱柱使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀、阻塞、塔板数降低。一般应该用20倍床体积的流动相冲洗；隔几天再用的HPLC，最好用20％甲醇和80％水溶液冲洗30分钟左右后，再用纯甲醇冲洗20分钟后保存。一般情况下，保存HPLC色谱柱时，应该将色谱柱内充满乙腈或甲醇，并接头拧紧，以防溶剂挥发。

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