北京普天同创生物科技有限公司
一般使用者应该特别重视流动相的pH。有时候,pH可以决定分析工作的成败。例如,如果pH太大时样品的几个峰不能分开,则可以通过调节pH将峰分开,并且能分得很好。一般使用时,试样的pH不要小于3,否则容易损坏色谱柱(耐酸性的色谱除外);一般C18柱的pH小于3时,就开始对色谱柱产生损害。但是抗酸性的柱可以使用的pH能达到2,甚至1,但是最好还是控制在2以上为好。
HPLC流动相的流速要适当,否则会影响峰形、浪费溶剂;一般常规分析工作大多选择1mL/min。
气泡进柱会严重影响HPLC的稳定性,有可能损坏柱子,所以要注意对流动相的脱气。
所谓试剂的截止波长,就是试剂开始不透光的波长,或试剂的透光和不透光的交点处的波长。对HPLC的使用者来讲,这是一个非常重要的问题,因为我们必须要选择透光的试剂才能得到分析测试结果。例如,乙腈的截止波长为215nm、丙酮的截止波长为330nm、正丁烷的截止波长为210nm等。如果分析工作需要选用这些试剂,则被分析测试的样品的分析波长(吸收波长或吸收峰)必须大于这些截止波长5 nm以上,否则很难或不可能得到好的分析测试结果。作者经过几十年的实践,积累了一批溶剂的截止波长,如表7-1所示。
表7-1 紫外区常用溶剂的最短可用波长
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