1 测量方法

测量依据：GB/T 22509-2008《动植物油脂苯并(a)芘的测定反相高效液相色谱法》

本例检测煎炸过的食用油的苯并(a)芘含量，评定该含量的测量不确定度。

依据GB 2762-2012，合格限量为：苯并(a)芘含量≤10ug/kg。

1.1仪器与试剂

Agilent高效液相色谱仪1260 infinity/G1311C(自编号C2130);

Sartorius CP225D(自编号C1375)电子天平；

移液管；

200uL移液器(自编号C2233) ;

容量瓶；

对照品：苯并(a)芘标准品，CAS编号50-32-8，纯度99.6％;

试剂：正己烷、乙腈、四氢呋喃。

1.2测量方法与流程

采用高效液相色谱法，标准曲线法测量样品试液，流程如图1所示。

按GB/T 22509-2008的技术规定(依实际情况稍作改变)，测定步骤如图1所示各阶段组成。

各步骤如下：

①样品前处理(平行操作两份)：称取样品0.4g(精确至0.1mg)于离心管中，用2mL正己烷溶解涡旋混合1min。将溶解好的油样添加到预先活化好的氧化铝柱子中，用5mL正己烷分次润洗离心管，转入柱子中。前7mL流出正己烷不予收集。添加80mL正己烷，用旋蒸瓶接收，直到80mL正己烷完全自然流出。将洗脱液在45℃水浴中旋转蒸发至干。用总计10mL正己烷分3次淋洗旋蒸瓶，合并淋洗液到氮吹管中，氮气吹干。加入0.3mL乙腈＋四氢呋喃(90+10)到氮吹管中，在涡旋混合器上充分混匀，得样品试液，待测。

②制备系列标准溶液：用苯并(a)芘标准品配制成5.07ug/mL、10.15ug/mL、20.30ug/mL、40.60ug/mL、50.75ug/mL系列标准溶液(因为检测“煎炸过的食用油”，苯并(a)芘含量比较高，所以，与GB/T 22509-2008的规定相比，相应提高了系列标液的浓度)。

图1 油脂中苯并(a)芘的测定流程

③检测标液拟合标准曲线：反相高效液相色谱法检测系列标液峰面积(每个浓度测量一次)并拟合标准曲线(直线)方程，系列标准溶液检测数据见表1，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，应用最小二乘法拟合标准曲线(直线)图，见图2。

拟合直线方程为：

A_标=B₁ρ_标＋B₀=0.1275ρ_标-0.1580            (1)

式中：

A_标—标液峰面积，LU·s(峰面积单位LU·s是色谱图上给出的非SI单位，不参与量值传递，可视为无量纲)；

B₁—标准曲线斜率，mL/ng;

ρ_标—标液浓度，ng/mL;

B₀—标准曲线截距，LU·s。

表1 系列标准溶液检测数据

图2 拟合标准曲线(直线)图

④检测试液：将样品试液加入到液相色谱仪的2mL进样瓶内插管中，按反相高效液相色谱法检测试液峰面积A试液，为获得预评估的测量重复性数据，平行操作10份。

⑤计算测得值：

按GB/T 22509-2008式(1)计算测得值，本例依据GB 3102.8-1993将原公式试样中苯并(a)芘的质量浓度的符号c改为ρ试液，见式(2)：

式中：

w—为样品中苯并(a)芘的质量分数，ug/kg;

ρ_试液—从标曲得到的样品试液中苯并(a)芘的质量浓度，ρ_试液-(A_试液-B₀)/B₁,B₀和B₁由式(1)获得，ng/mL;

V—为样品试液定容体积，mL;

m—为样品的称量质量，g。

10个平行样的重复性测量数据见表2:

表2 10个平行样的重复性测量数据

文章来源：《食品药品检测测量不确定度评定实例》

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