二、氯霉素类抗生素残留检验

氯霉素类(chloramphenicols, CAPS)兽药包括氯霉素(chloramphenicol, CAP)、棕榈氯霉素(chlo-ramphenicol palmitate, CRP)、乙酰氯霉素(cetofenicol, CF)、甲砜霉素(thiamphenicol,TAP),氟甲砜霉素(florfenicol, FF)等。

(一)概述

氯霉素类抗生素是1-苯基-2-氨基-1-丙醇的二乙酰胺的衍生物。其结构如下。

不同的氯霉素类抗生素,R₁、R₂、R₃位上连接的基团不同。常见的氯霉素类抗生素见表8-3。

表8-3 氯霉素类抗生素结构式及理化性质

CAPS对骨髓细胞、肝细胞有毒性作用，可导致氯霉素敏感者发生严重的再生障碍性贫血，是禁止用于食品动物并不得在动物性食品中检出的抗生素。MRL为不得检出。

食品中CAPS残留检验方法有GC、HPLC、GC-MS、LC-MS/MS和ELISA法。本章主要介绍HPLC-MS/MS法(GB/T 22338)。

(二)高效液相色谱-串联质谱法

1．原理针对不同样品中氯霉素类兽药残留，分别用乙腈、乙酸乙酯-乙醚或乙酸乙酚提取，提取液用固相萃取柱进行净化，液相色谱-串联质谱仪测定，氯霉素采用内标法定量；甲砜霉素、氟甲砜霉素采用标准曲线法定量。

2．分析步骤

(1)样品制备：取代表性的样品，经匀质后，用四分法缩分，将样品均分为两份，装入清洁容器中，加封、标记。一份作测定，一份作留样。所制备的样品在-20℃下保存。

(2)提取：①动物肌肉组织和水产品：称取适量样品，加入氯霉素氘代内标(氯霉素-D5)工作液和乙腈，匀浆，离心，将上清液加乙腈饱和的正己烷，振荡，静置分层，转移乙腈层。残渣再加入乙腈，再提取一次，合并上清液，取乙腈层加入正丙醇，于40℃水浴中旋转蒸发浓缩近干，用氮气吹干，加丙酮-正己烷溶解残渣；②动物肝、肾组织：准确称取样品加入乙酸钠缓冲溶液，匀质，再加少量β-葡萄糖醛酸苷酶，于37℃温育过夜酶解样品，加入氯霉素氖代内标(氯霉素-D₅)工作液和乙酸乙酯-乙醚，振荡混匀后离心，取有机层于40℃水浴中旋转蒸发近干，用氮气吹干，加丙酮-正己烷溶解残渣。③蜂蜜：称取样品加氯霉素氘代内标(氯霉素-D)工作液和水，混匀，再加入乙酸乙酯，振荡混匀后离心，取有机层重复提取，合并有机层于40℃水浴中旋转蒸发至干，加水溶解残渣，混匀。

(3)净化：①动物组织和水产品：用丙酮-正己烷淋洗LC-Si硅胶小柱，弃去淋洗液，将提取液转移到小柱上，弃去流出液，用丙酮-正己烷洗脱，收集洗脱液于40℃水浴中旋转蒸发近干，用氮气吹干，加适量水定容，经0.45um滤膜过滤，待测定；②蜂蜜：分别用少量甲醇、水活化EN固相萃取柱，将提取液转移上柱，用水淋洗，适量乙酸乙酯洗脱，洗脱液用氮气吹干，用水溶解后定容，过0.45um滤膜，待测定。

(4)测定：①液相色谱测定条件：C₁₈色谱柱(150mm×2.1mm, 5um)，或相当者；流动相：水-乙腈-10mol/L乙酸铵溶液，梯度洗脱。流速为0.6ml/min；柱温：40℃；进样量为20ul；②MS测定条件：电离模式，电喷雾离子源；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多重反应检测(MRM)；电喷雾电压：-4500V；离子源温度：550℃;(氯霉素类定性、定量离子碰撞气能量和去族电压见表8-4。

表8-4 氯霉素类定性、定量离子、碰撞气能量和去族电压

定性鉴定：样品中化合物质量色谱峰的保留时间与标准溶液的保留时间相比，允许偏差在±2.5％之内；待测化合物定性离子对的重构离子色谱峰的信噪比(S/N)≥3;定量离子对的重构离子色谱峰的信噪比(S/N)≥10;定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准溶液相比，相对丰度偏差不超过表8-5的规定，则可判断样晶中存在相对的目标化合物。

表8-5 定性时相对离子丰度的最大允许偏差

定量测定：氯霉素采用内标法定量；甲砜霉素、氟甲砜霉素采用标准曲线法定量。

3．方法说明本法适用于水产品、畜禽产品、畜禽副产品和蜂蜜中氯霉素类药物残留检验。方法测定低限为0.1ug/kg。

文章来源：《食品理化检验》

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