一、四环素类抗生素残留检验

(一)概述

四环素类抗生素(tetracycline,TCs)是家畜、家禽常用的防病治病药物。其中使用较多的有四环素(tetracycline, TC)、土霉素(oxytetracycline,OTC)、金霉素(chlortetracycline, CTC)。

四环素类抗生素具有十二氢化并四苯基本结构。该类药物有共同的A、B、C、D四个环的母核，化学结构式为：

TC、OTC、CTC的区别在于结构式中R₅和R₇位上连结不同的离子或基团。

化学结构中4位的二甲氨基显碱性，C3、C5、C6、C10、C12、Cl2a含有酚羟基或烯醇基，显酸性，故为酸碱两性化合物。TCs抗生素的理化性质见表8-2。

表8-2 四环素类抗生素的理化性质

在我国，四环素类兽药允许使用，但有最高残留限量规定的兽药。如果滥用，特别是在动物宰杀时休药期不够，容易在动物体内残留，对人体健康带来危害。四环素类MRL为≤100ug/kg。四环素类残留检验方法主要有HPLC法和LC-MS/MS法(GB/T 21317)，以及ELISA法。

(二)高效液相色谱法

1．原理样品中四环素类兽药用0.1mol/L Na₂EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(pH4.0±0.05)提取，经过滤和离心后，上清液用HLB固相萃取柱净化，用反相液相色谱分离，紫外检测器检测。用保留时间定性，标准曲线法或单点校正法定量。

2．分析步骤

(1)样品制备与贮存：从采集的全部样品中取出约500g牛奶样品充分混匀，动物肌肉、肝、肾和水产品等用组织捣碎机充分捣碎均匀，密封，于-18℃以下冷冻存放。

(2)提取：①动物肌肉、肝、肾和水产品：准确称取匀质样品，于聚丙烯离心管中，分别用0.1mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液漩涡混合，于冰水浴中超声提取三次，离心(温度低于15℃)，合并上清液，定容，混匀，离心(温度低于15℃)，过滤，待净化；②牛奶：精确称取匀质样品，用0.1mol/L EDTA-Mcllvain。缓冲溶液溶解定容，之后的操作同①。

(3)净化：准确吸取适量提取液，用HLB固相萃取柱净化，提取液流尽后，依次用水、甲醇水淋洗，弃去全部流出液。减压抽干，最后用适量甲醇-乙酸乙酯溶液洗脱。将洗脱液吹氮浓缩至干，用少量甲醇-三氟乙酸水溶液溶解残渣。过0.45um滤膜，待测定。

(4)测定：色谱参考条件为Inertsil C8-3色谱柱(150mm×2.1mm, 5um)；流动相：甲醇-乙腈-10mmol/L三氟乙酸；检测波长350nm；柱温为30℃；流速：1.5mL /min；进样量：100ul；梯度洗脱。绘制工作曲线，与标准比较定性、定量。

3．方法说明本法适用于动物肌肉、肝、肾、水产品、牛奶中米诺环素、土霉素、四环素、去甲基金霉素、金霉素、美他环素、多西环素等七种兽药残留测定。上述7种兽药的保留时间依次为6.3分钟、7.5分钟、7.9分钟、8.7分钟、9.8分钟、10.4分钟、10.8分钟。方法检测限均为50ug/kg。

相关链接:动物性食品中兽药残留检验

文章来源：《食品理化检验》

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