1 范围

本标准规定了牛尿中β-雌二醇残留量气相色谱-负化学电离质谱测定方法。

本标准适用于牛尿中β-雌二醇残留量的测定。

本标准的方法检出限：0.25ug/L。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确：度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004，ISO 5725-1：1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)

3 原理

牛尿中雌二醇经过酶水解和固相萃取柱净化后、经酰化衍生化后，用气相色谱-负化学电离质谱选择离子监测模式测定，内标法定量。

4 试剂和材料

除另有规定外，试剂均为分析纯；水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 β-葡糖苷酸酶和芳基硫酸苷酶：Helix pomatia，含件葡糖苷酸酶100000单位/mL，硫酸酯酶≤1000单位/mL。

4.2 甲醇：色谱纯。

4.3 四丁基甲醚(MTBE)：色谱纯。

4.4 乙酸乙酯：色谱纯。

4.5 正己烷：色谱纯。

4.6 吡啶：色谱纯。

4.7 异辛烷：色谱纯。

4.8 衍生化试剂：五氟苯甲酰氯，在避光、防潮环境冷冻储藏。

4.9 碳酸氢钾。

4.10 三水乙酸钠。

4.11 无水硫酸钠。

4.12 甲醇＋水溶液(1+1)：取100 mL甲醇(4.2)和100 mL水充分佩合。

4.13 甲醇+四丁基甲醚溶液(1+9)：取20 mL的甲醇(4.2)和180 mL四丁基甲醚(4.3)充分混合。

4.14 乙酸钠缓冲液(pH=5.2)：称取43 g三水乙酸钠(4.10)用水溶解，加入25.2 g冰乙酸用水定容至1000 mL，有效期6个月。

4.15 干燥乙酸乙酯：在密封试管中加入500 mg无水硫酸钠和20 mL乙酸乙酯，振荡混合约30 min后，2 000 r/min离心10 min。

4.16 乙酸乙酯+吡啶(90＋10)：将10 mL吡啶和90 mL干燥的乙酸乙酯混合，室温保存。一周内使用。

4.17 碳酸氢钾(KHCO₃)溶液：0.5 mol/L。称5 g KHCO3于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度。一周内有效。

4.18 Oasis HLB固相萃取柱：60 mg, 3 mL或相当者。使用前分别依次用3 mL四丁基甲醚(4.3),3 mL甲醇(4.2),3mL纯水活化，保持柱体湿润。

4.19 标准物质：β-雌二醇，纯度≥99％。

4.20 内标标准物质：β-雌二醇-2,4,16,16-D4，纯度≥99％。

4.21 β-雌二醇标准溶液：准确称量10 mg标准物分别于100 mL容量瓶中，用甲醇(4.2)定容至刻度，浓度100 ug/mL，储备液贮存于-20℃，有效期一年。再以甲醇稀释成适用浓度的溶液，保存于4℃冰箱中。

4.22 内标标准溶液：准确称量10 mg标准物分别于100 mL容量瓶中，用甲醇(4.2)定容至刻度，浓度100 ug/mL，储备液贮存于-20℃，有效期一年。再以甲醇稀释成适用浓度溶液，保存于4℃冰箱中，可使用三个月。

4.23 标准工作溶液：将β-雌二醇标准溶液(4.21)和β-雌二醇D4(4.22)混合，按照7.3步骤衍生化后备用。

5 仪器

5.1 气相色谱-质谱仪：配有负化学源。

5.2 离心管：5 mL和10 mL，具塞。

5.3 移液器：20 uL～100uL, 200uL～1000uL。

5.4 分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.5 离心机。

5.6 涡旋混匀器。

5.7 氮气浓缩仪。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

取有代表性样品，制成实验室样品。试样分为两份，置于样品瓶中，密封，并做上标记。

6.2 试样保存

将试样置于2℃～8℃下保存。

文章来源：《化学试剂标准汇编》

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