6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

去掉牛肌肉中的骨头和皮，将其搅拌均匀。分出0.5kg作为试样，将制备好的试样密封，并贴上标签。

6.2 试样的保存

将试样置于-18℃条件下贮存。

7 分析步骤

7.1 提取

称取2.0 g试样，于50 mL聚丙烯离心管中，加入乙酸钾溶液(4.12)5mL，高速旋涡混合10 s。混合后向样品中加入30 uL乙酸，调节样品pH至4.5，旋涡混合。再加入70 uL新配制的β-葡萄糖苷酸酶溶液(4.3)混合，于振荡器37℃条件下低速振荡16h。分别向样品中加入5 mL乙腈，旋涡混合5 s,离心10 min(3200r/min)。转移上清液至50 mL离心管中。在原液中加入5 mL乙腈和1 mL乙酸钾溶液(4.12)旋涡混合，离心，将上清液转移至50 mL离心管中，合并上清液，待净化。

7.2 净化

在混合的上清液中加入5 mL正己烷和50 uL浓盐酸，旋涡混合15 s。离心5 min(3200 r/min)。弃去正己烷层，重复上述步骤一次。55℃条件下氮吹使其体积小于5 mL：加入磷酸二氢钾缓冲溶液(4.15)7mL，旋涡混合，超声20 s。17℃条件下离心15 min (3200r/min)：采用固相萃取柱(5.11)，用3 mL甲醇和3 mL,水活化柱，将样品过柱，弃去过柱液，然后用3 mL水和6 mL甲醇洗柱，弃去过柱液。加大真空度抽滤10 min。用2 mL正己烷淋洗柱子两次并弃去淋洗液。用2 mL乙酸正己烷溶液(4.19)洗提柱子两次，用15 mL离心管收集洗脱液。在55℃条件下将洗脱液氮吹至干。随后，在每个样品中加入混合流动相(4.9)1mL，旋涡混合5s，超声5s。样液用0.45 um的滤膜过滤到进样瓶中，待测。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱测定条件

a)色谱柱：Inertsil, ODS-3, 250 mm×4.6 mm, 5 um，或相当者；

b)流速：0.4 mL/min;

c)检测波长：285 nm;

d)柱温：35℃；

e)进样量：20 uL;

f)运行时间：20 min;

g)延迟时间：10 min,

7.3.2 液相色谱测定

用氟胺烟酸的标准基质溶液(4.24)分别进样，以峰面积和工作标准溶液浓度绘制标准工作曲线，样品溶液中氟胺烟酸的响应值应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，氟胺烟酸保留时间约为13.0min，标准物质色谱图。氟胺烟酸的添加浓度及其平均回收率的试验数据。

7.4 平行试验

按照上述步骤，对同一试样进行平行试验。

7.5 回收率试验

空白样品中添加标准溶液按7.1和7.2操作，测定后计算样品添加的回收率。

8 结果计算

按式(1)计算试样中氟胺烟酸的残留量：

式中：

X—试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克(mg/kg) ;

c—从标准曲线上得到被测组分溶液的浓度，单位为微克每毫升(ug/mL) ;

V—样品溶液定容体积，单位为毫升(mL);

m—样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。

注：计算结果需将空白值扣除。

9 精密度

本标准的精密度数据是按照GB/T 6379.1和GB/T 6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的值以95％的可信度来计算。

9.1 重复性

在重复性条件下．获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，牛肌肉中氟胺烟酸含量范围及重复性限方程为：0.01 mg/kg～0.20 mg/kg和lgr=0.836 1lgm-0.8509。

如果差值超过重复性r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。

9.2 再现性

在线性条件下．获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，牛肌肉中氟胺烟酸含量范围及再现性方程为：0.01 mg/kg～0.20 mg/kg和R=0.1987m+0.0046。

相关链接：液相色谱-紫外检测法测定牛肌肉中氟胺烟酸残留量（一）

文章来源：《化学试剂标准汇编》

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