1 范围

本标准规定了牛和猪脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮残留量的液相色谱测定方法。

本标准适用于牛和猪脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮残留量的测定。

本标准的方法检出限：醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮均为0.010 mg kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004，ISO 5725-1：1994，IDT)

GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379. 2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992 , neq ISO 3696:1987)

3 原理

脂肪样品经微波融化，用乙腈提取，皂化后，经氰丙基型固相萃取柱净化，C₁₈色谱柱分离，紫外检测，外标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 乙腈：色谱纯。

4.2 甲醇：色谱纯。

4.3 乙酸乙酯：色谱纯。

4.4 正己烷：色谱纯。

4.5 氯化镁(MgCl₂·6H₂O)。

4.6 氢氧化钠。

4.7 盐酸。

4.8 乙酸乙酯＋正己烷(1-19)：量取10 mL乙酸乙酯(4.3)与190 mL正己烷(4.4)混合。

4.9 乙酸乙酯＋正己烷(1+4)：量取40 mL乙酸乙酯(4.3)与160 mL正己烷(4.4)混合。

4.10 盐酸溶液：0.2％。移取2.0 mL盐酸(4.7)与水混合至1L。

4.11 氯化镁溶液：1.0 mol/L。称取20.3g氯化镁(4.5)，用水溶解并定容到100 mL。

4.12 氢氧化钠溶液：0.1 mol/L。称取1.00g氢氧化钠(4.6)，用水溶解并定容到250 mL。

4.13 乙腈＋水(65+35)：量取650mL乙腈(4.1)与350 mL水混合，摇匀，脱气，待用。

4.14 标准物质：醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮，纯度≥97％。

4.15 标准储备溶液：1000 ug/mL。准确称取醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮(4.14)标准物质各0.0500g于50 mL容量瓶中，用甲醇(4.2)溶解并定容至刻度。标准储备溶液于4℃保存，可使用1年。

4.16 混合标准溶液Ⅰ：100 ug/mL。分别吸取10.0 mL醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准储备液(4.15)于100 mL容量瓶中，用甲醇定容。该混合标准溶液于4℃保存，可使用1年。

4.17 混合标准溶液Ⅱ：1.0 ug/mL。取1.0 mL混合标准溶液Ⅰ(4.16)于100mL容量瓶中，用甲醇定容。该混合标准溶液于4℃保存，可使用6个月。

4.18 混合标准工作溶液：分别吸取10 uL,20uL,40uL,80uL,100uL混合标准溶液Ⅱ(4.17)添加到980uL,920uL,950uL,910uL,890uL的乙腈＋水(65+35)(4.13)中，再加入10 uL盐酸溶液(4.10),混匀，得到浓度为0.010ug/mL,0.020ug/mL,0.040ug/mL,0.080ug/mL和0.10ug/mL混合标准工作溶液，该溶液当日制备。

4.19 氰丙基固相萃取柱或相当者：3 mL, 500 mg。使用前分别用5 mL乙酸乙酯和6 mL正己烷淋洗，保持柱体湿润。

4.20 滤膜：0.2um。

5 仪器

5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器：

5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.3 氮气浓缩仪：

5.4 固相萃取装置：配有真空泵。

5.5 低温离心机：-5℃至室温，最大转速5000r/min。

5.6 液体混匀器。

5.7 恒温水浴。

5.8 微波炉。

5.9 移液器：10uL～100uL和100uL～1000uL。

6 试样的制备与保存

6.1 试样制备

把大约5g的猪或牛脂肪组织切成小块，然后放入底部塞有玻璃棉的漏斗中，将漏斗放入150 mL的烧杯中，将烧杯置于微波炉内。使用最大功率，加热30s～60s，如果脂肪没有融化，可在间隔30 s～60 s以后重复加热30s～60s，直到有液体脂肪流出，通过漏斗滴入烧杯中。根据需要熬制的脂肪量，可重复加热。把熬制好的脂肪油放入样品瓶中，密封，并做上标记。

6.2 试样保存

如果熬制好的脂肪液体不立刻测定，则将熬制好的脂肪样品置于-18℃冰柜中，冷冻保存。

相关链接：猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定（三）

文章来源：《化学试剂标准汇编》

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