5 仪器和设备

5.1 液相色谱-串级质谱仪：配有电喷雾离子源(ESl)。

5.2 分析天平：感量0.01mg和0.01g。

5.3 振荡器。

5.4 超声波清洗器。

5.5 旋转蒸发器。

5.6 旋涡混合器。

5.7 离心机：转速不小于10000r/min。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

6.1.1 牛奶：取有代表性试样约500 g，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识。

6.1.2 奶粉：取有代表性试样约500 g，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识。准确称取12g乳粉试样(精确到0.01g)于250 mL烧杯中，少量多次加入50 mL煮沸并冷却到60℃左右的水溶解，冷却至室温后，移入100 mL容量瓶中，用少量水分次淋洗烧杯，淋洗液一并移入容量瓶，再用水定容到刻度，混匀，制备成奶粉复原乳试样。

6.2 试样的保存

将试样于4℃以下保存。

7 测定步骤

7.1 提取与净化

准确称取5g牛奶试样(精确到0.01g)或量取5.00 mL奶粉复原乳试样(6.1.2)于50 mL具塞离心管中，加入20 mL提取液(4.9)盖上盖混匀，置于振荡器上以300 r/min振荡10 min，在离心机中以10000r/min离心5min，将上层溶液用滤纸过滤于鸡心瓶，残渣再用20 mL提取液(4.9)超声提取10 min，以10000r/min离心3 min，将上层溶液用滤纸过滤，合并二次滤液，于低于40℃条件下旋转蒸发至近干(约剩余2 mL以下)，剩余液转移至10 mL具塞刻度离心管中，用甲醇(4.1)洗涤鸡心瓶，合并溶液并用甲醇(4.1)定容至5.00 mL，旋涡混匀1min，然后加入5 mL饱和了80％甲醇水的正己烷溶液(4.8)，旋涡混匀1 min，以3000r/min离心3 min，弃去上层正己烷层，再加入5 mL饱和了80％甲醇水的正己烷溶液(4.8)，旋涡混匀1 min，以3 000 r/min离心3 min，取下层溶液过0.2um滤膜(4.14)，供液相色谱-串联质谱测定。

7.2 阴性样品提取液的制备

取不含氮氨菲啶的阴性牛奶或者奶粉样品，按7.1步骤制备阴性样品提取液，用于配制氮氨菲啶基质标准工作溶液。

7.3 测定条件

7.3.1 液相色谱参考条件

液相色谱参考条件如下：

a)色谱柱：Acquity UPLC TM BEH C₁₈,1.7 um,100 mm×2.1 mm(内径)或相当者；

b)柱温：35℃；

c)进样量：5 uL;

d)流动相及流速见表1。

表1 液相色谱梯度洗脱条件

7.3.2 质谱参考条件

质谱参考条件如下：

a)离子源：电喷雾离子源(ESI)；

b)扫描方式:正离子扫描；

e)锥孔电压：31V;

f)离子源温度：110℃；

g)脱溶剂温度：400℃；

h)脱溶剂气流量：450L/h;

i)锥孔气流量：50 L/h;

J)碰撞室压力：0.415Pa;

k)碰撞气氢气；

I)氮氨菲啶定量离子对、定性离子对及碰撞能量见表2。

表2 氮氨菲啶定性离子对、定量离子对、碰撞能量及驻留时间

相关链接：牛奶和奶粉中氮氨菲啶残留量的测定（一）

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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