北京普天同创生物科技有限公司
1 范围
本标准规定了牛奶、奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2含量的液相色谱-荧光检测法。
本标准适用于牛奶、奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2含量的测定。
本标准方法的检出限:牛奶中:黄曲霉毒素B1为0.002ug/kg,黄曲霉毒素B2为0.001 ug/kg,黄曲霉毒素G1、G2为0.003 ug/kg,黄曲霉毒素M1,M2为0.005ug/kg;奶粉中:黄曲霉毒素B1为0.02ug/kg,黄曲霉毒素B2为0.01ug/kg,黄曲霉毒素G1,G2为0.03 ug/kg,黄曲霉毒素M1、M2为0.05 ug/kg。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)
GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)
3 原理
试样经溶解、离心、过滤后,当样品通过免疫亲和柱时,黄曲霉毒素特异性抗体选择性地与存在的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2(抗原)键合,形成抗体-抗原复合体。甲醇-乙腈混合溶液洗脱,带荧光检测器的高效液相色谱仪经柱后衍生测定黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的含量,外标法定量。
4 试剂和材料
除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 甲醇:色谱纯。
4.2 乙腈:色谱纯。
4.3 过溴化溴化吡啶。
4.4 甲醇-乙腈混合溶液(4+5):取40 mL甲醇,加入50 mL乙腈,混合均匀。
4.5 柱后衍生液:称取0.05 g过溴化溴化吡啶,溶解于1000 mL水中,以0.45um的尼龙滤膜过滤,4℃避光保存。
4.6 黄曲霉毒素B1(CAS NO.1162-65-8)、B2(CAS NO.7220-81-7)、G1(CAS, NO.1165-39-5)、G2(CAS NO.7241-98-7)、M1(CAS NO.6795-23-9)、M2(CAS NO.6885-57-0)标准物质:纯度大于等于99%。
4.7 黄曲霉毒素(B1、B2、G1、G2、M1、M2)标准储备溶液:将黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2标准物质(4.6),分别用甲醇配成60 ng/mL的标准储备液。储备液于-4℃保存。
4.8 黄曲霉毒素(B1、B2、G1、G2、M1、M2)混合标准工作液:根据需要用流动相将黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2稀释成所需浓度的混合标准工作溶液,混合标准工作溶液现用现配。
4.9 免疫亲和柱:免疫亲和柱应含有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的抗体。亲和柱的最大容量不小于100 ng黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2(相当于50 mL浓度为2 ug/L的试样)。
4.10 滤膜:0.45 um。
相关链接:奶粉中叶黄素的测定(二)
文章来源:《常用兽药残留量检测方法》
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