5 仪器和设备

5.1 液相色谱仪：配有荧光检测器，带柱后衍生系统。

5.2 分析天平：感量0.1 mg，0.01g。

5.3 水浴：50℃±2℃。

5.4 冷冻离心机。

5.5 空气压力泵。

5.6 旋涡混合器。

5.7 玻璃纤维滤纸：孔径1.5 um。

5.8 塑料离心管：50 mL。

5.9 玻璃注射器：10 mL。

5.10 玻璃刻度试管：10 mL。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

将牛奶从冰箱中取出，放置至室温，摇匀，备用。

6.2 试样保存

牛奶置于0℃～4℃冰箱中避光保存，奶粉常温避光保存。

7 测定步骤

7.1 提取

7.1.1 牛奶

称取20g试样，精确到0.01g，置于50 mL的离心管中。于10000r/min, -5℃条件下离心10 min，玻璃纤维滤纸过滤，待净化。

7.1.2 奶粉

称取2g试样，精确到0.01g，置于50 mL的离心管中。将20 mL已预热到50℃的水边加边振摇至奶粉完全溶解，旋涡混合器(5.6)振荡2 min,混合均匀。如果奶粉不能完全溶解，将离心管在50℃的水浴(5.3)上加热，仔细混匀。将奶粉乳浊液冷却至室温后，于10000r/min、-5℃条件下离心10 min，再用玻璃纤维滤纸过滤，待净化。

7.2 净化

将7.1的过滤液全部转移到10 mL玻璃注射器(5.9)中，调节空气压力泵(5.5)，控制试样以2mL/min～3 mL/min稳定的流速过柱，直至2 mL～3 mL空气通过柱体。

向上述注射器内加入10 mL水，以稳定的流速洗柱，弃去全部流出液，并使2 mL～3 mL空气通过柱体。准确加入1.0mL甲醇-乙腈混合溶液(4.4)至上述注射器，以2 mL/min～3 mL/min稳定的流速将亲和柱上的黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂、M₁、M₂洗脱下来，收集全部洗脱液于玻璃刻度试管(5.10)中，用水定容至2 mL。于旋涡混合器(5.6)上振荡1 min，过0.45um滤膜(4.10)。供液相色谱测定。

7.3 测定条件

7.3.1 液相色谱参考条件

a)色谱柱：Inertsil ODS-3,5 um, 250 mm×4.6 mm(内径)或相当者；

b)流动相：水＋甲醇＋乙腈(11+4+5)；

c)流速：流动相：1.0 mL/min，柱后衍生液：0.45 mL/min，柱后衍生反应器温度：35℃；

d)柱温：35℃；

e)检测波长：激发波长：355 nm。发射波长：430 nm;

f)进样量：100 uL。

7.3.2 液相色谱测定

根据样液中黄曲霉毒素B1、B₂、G₁、G₂、M₁、M₂的含量情况，选定浓度相近的混合标准工作液，混合标准工作液中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的响应值应在仪器检测的线性范围内。对混合标准工作液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂、M₁、M₂参考保留时间分别为7.1min、8.0min、9.2 min、10.6 min、11.4 min、13.3 min。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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