诱惑红(fancy red, allura red)为化学合成色素，深红色均匀粉末，无臭。溶于水，可溶于甘油与丙二醇，微溶于乙醇，不溶于油脂。溶于水呈微带黄色的红色溶液。耐光、耐热性强，耐碱及耐氧化还原性差。

诱惑红可为食品添加剂的红色染料，但必须符合国家限量标准。

1．检测原理

诱惑红在酸性条件下被聚酰胺粉吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法进行分离后，与标准比较定性、定量。

2．检测范围

适用于糖果包衣等食品中诱惑红的测定。本方法的取样量10g时，最低检出限为25mg/kg。线性范围为0～12mg/L。

3．试剂与材料

(1)石油醚：沸程30～60℃；甲醇；聚酰胺粉(尼龙6):200目；硫酸：1+10；氢氧化钠：50g/L；乙醇溶液：50％(体积比)；柠檬酸溶液：200g/L；钨酸钠溶液：100g/L。

(2)海砂：先用盐酸(1+10)煮沸15min，用水洗至中性，再用氢氧化钠(50g/L)煮沸15min，用水洗至中性，再于105℃干燥，储于具塞瓶中保存，备用。

(3)乙醇-氨溶液：取2mL的氨水，加70％(体积比)乙醇至100mL。

(4)PH6的水：用20％的柠檬酸调至pH6。

(5)诱惑红的标准溶液：准确称取0.025g诱惑红，加水溶解，并定容至25mL,即得1mg/mL。

(6)诱惑红的标准使用溶液：吸取诱惑红的标准溶液5.0mL于50mL容量瓶中，加水稀释到50mL，即得0.1mg/mL。

(7)展开剂：

①丁酮-丙酮-水-氨水(7＋3+3+0.5)。

②正丁醇-无水乙醇-100氨水(6＋2＋3)。

③2.5％柠檬酸钠-氨水-乙醇(8+1+2)。

4．仪器

(1)可见分光光度计。

(2)微量注射器，10、50uL。

(3)展开槽。

(4)电吹风机。

(5)滤纸：中速滤纸，纸色谱用。

(6)恒温水浴锅。

(7)台式离心机。

5．检测步骤

1)样品的处理

(1)汽水。将样品加热去二氧化碳后，称取10.0g样品于烧杯中，然后用20％柠檬酸调pH呈酸性，加入0.5～1.0g聚酰胺粉吸附色素，将吸附色素的聚酚胺粉全部转到漏斗中过滤，用pH4的酸性热水洗涤多次(约200mL)，以洗去糖等物质。若有天然色素，用甲醇-甲酸溶液洗涤1～3次，每次20mL，至洗液无色为止。再用70℃的水多次洗涤至流出液中性。洗涤过程必须充分搅拌，然后用乙醇-氨溶液分次解吸色素，收集全部解吸液，于水浴上驱除氨，蒸发至2mL左右，转入5mL的容量瓶中，用50％的乙醇分次洗涤蒸发皿，洗涤液并入5mL的容量瓶中，用50％的乙醇定容至刻度。此液留作纸色谱用。

(2)硬糖。称取10.0g已粉碎的样品，加入30mL水，温热溶解，若样品溶液的pH较高，用柠檬酸溶液调至pH4左右。以下操作从“加入0.5～1.0g聚酰胺粉吸附色素，，起，按“汽水，，操作。

(3)糕点。称取10.0g已粉碎的样品，加入30mL石油醚提取脂肪，共提3次，然后用电吹风吹干，倒入漏斗中，用乙醇-氨挤液解吸色素，解吸液于水浴上蒸发至20mL，加入1mL的钨酸钠溶液沉淀蛋白，真空抽滤，用乙醇-氨溶液解吸滤纸上的诱惑红，然后将滤液于水浴上挥去氨，调pH呈酸性，以下从“加入0.5～1.0g聚酰胺粉吸附色素”起，按“汽水”操作。

(4)冰淇淋。称取10.0g已均匀的样品于烧杯中，加入20g海砂，15mL石油醚提取脂肪，提取2次，倾去石油醚，然后在50℃的水浴上挥去石油醚，再加入乙醇-氨溶液解吸诱惑红，解吸液倒入100mL的蒸发皿中，直至解吸液无色。将解吸液于水浴上挥去乙醇，体积约为20mL时，加入1mL硫酸(1+10), 1mL钨酸钠溶液沉淀蛋白，放置2min，然后用乙醇-氨溶液调至pH呈碱性，将溶液转入离心管中，5000r/min,离心15 min，倾出上清液，于水浴上挥去乙醇，然后用柠檬酸溶液调pH呈酸性，以下从“加入0.5～1.0g聚酰胺粉吸附色素”起，按“汽水”操作。

2)定性

取色谱用纸，在距底边2 cm起始线上分别点3～10uL的样品处理液、1 mL色素标准液，分别挂于盛有展开剂的三种展开槽中，用上行法展开，待溶剂前沿展至15 cm处，将滤纸取出空气中晾干，与标准斑比较定性。

3)定量

(1)标准曲线的制备。

(2)吸取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL诱惑红标准使用液，分别置于10 mL比色管中，各加水稀释到刻度。用1cm比色杯，以零管调零点，于波长500 nm处，测定吸光度，绘制标准曲线。

(3)样品的测定。取色谱用纸，在距离底边2 cm的起始线上，点0.20 mL样品处理液，从左至右点成条状。纸的右边点诱惑红的标准溶液1uL，依法展开，取出晾干。将样品的色带剪下，用少量热水洗涤数次，洗液移入10 mL的比色管中，加水稀释至刻度，混匀后，与标准管同时在500 nm处，测定吸光度。

6．结果计算

式中：X—试样中的诱惑红的含量，g/kg;

m₁—测定用试样处理液中诱惑红的量，mg;

m—试样的质量，g;

V₁—试样解吸后总体积，mL;

V₂—试样纸层析用体积，mL。

计算结果保留两位有效数字。

7．精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。

相关链接：食品中合成着色剂的检测技术-薄层色谱法

文章来源：《食品安全快速检测技术》

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