抗体的制备(五)
来源/作者:中国标准物质网  日期:2019-05-14

四、多克隆抗体与单克隆抗体的比较

商品化的免疫吸附剂或免疫亲和柱一般采用单克隆抗体。这是因为单克隆抗体可以在培养液中大量制备,并且抗体具有良好的均一性,便于产品的质量控制。另外,对于同样浓度的单克隆抗体和多克隆抗体来说,单克隆抗体溶液中对目标化合物的结合位点相对较多,因此,用单克隆抗体制备的免疫亲和吸附剂可以得到比较高的吸附容量。

与单克隆抗体相比,多克隆抗体具有制备简单、费用低廉、制备周期短等特点,因此许多研究者在对某种化合物的免疫萃取方法进行初步研究时,多采用多克隆抗体,这样可以节省大量的前期准备时间及费用。并且,通过用不同半抗原平行免疫多只动物,然后对所获得的相应抗体的免疫萃取能力进行综合评价,可以选择出最佳的半抗原,用于后期商业生产中单克隆抗体的制备。

五、抗体的选择

与其他免疫分析方法(ELISA、RIA、Immunosensors)不同,免疫亲和柱中所用的抗体与目标化合物的亲和力必须适中。通常,在免疫亲和萃取或亲和色谱中,所用抗体的解离常数(Kd)应在10-8~10-7 mol·L-1之间,如果免疫吸附剂是用亲和力较高(Kd<10-10 mol·L-1)的抗体制成的,那么,在洗脱时就需要比较严苛的条件才能将目标化合物洗脱下来,这就会导致对某些不稳定化合物的回收率降低,并且会降低免疫吸附剂的使用寿命。相反,如果抗体的亲和力太低(Kd>10-6 mol·L-1),则免疫亲和柱从液相中萃取目标化合物的能力就会显著降低,结果会导致对溶质的分离能力差、分析物流失。

对多克隆抗体来说,通常用亲和性选择的方法选择亲和性适中的抗体。一般的步骤是:将目标化合物固定在载体上,装柱,抗血清通过这个柱子而被捕获;然后,用洗脱液,不断降低pH值,进行梯度洗脱[例如:用0.2 mol·L-1的Na2HPO4+(0~100%)(体积分数)的0.1mol·L-1醋酸]或者不断提高离液剂(chaotropic agent)的浓度(例如:用0~3 mol·L-1的NaSCN),选择洗脱条件比较温和的抗体制备免疫亲和柱。同样,在制备单克隆抗体时也要选择分泌的抗体既具有特异性,又具有比较温和的解离条件的杂交瘤细胞进行克隆化。

但是,需要指出的是,多克隆抗体不适于制备商业化免疫亲和柱。因为一般一支免疫亲和柱需要结合mg级的抗体,多克隆抗体的产生方式显然难以满足这么巨大的需求。因此,适用于制备商业化免疫亲和柱的抗体必须满足如下条件:①单克隆抗体;②细胞分泌量大且稳定;③抗体对目标物的亲和力适中;④抗体对目标物的选择性满足要求。

相关链接:抗体的制备(四)

文章来源:《环境样品前处理技术》

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