1 范围

本标准规定了进出口饮料中维生素C(抗坏血酸)含量的荧光光度测定方法。

本标准适用于各类进出口饮料中维生素C(抗坏血酸)含量的测定。

2 测定方法

2.1 方法提要

样品用草酸提取，然后用2,6-二氯酚靛酚将抗坏血酸氧化为顺式抗坏血酸，再与邻苯二胺结合生成一种荧光化合物。用荧光分光光度计测定荧光强度，与标准比较定量。

2.2 试剂

要求使用去离子水及无荧光试剂。

2.2.1 1％草酸溶液。

2.2.2 50％乙酸钠溶液。

2.2.3 3％硼酸溶液。

2.2.4 硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100 mL 50％乙酸钠溶液中。

2.2.5 邻苯二胺溶液：称取20 mg邻苯二胺溶于100 mL水中。

2.2.62,6-二氯酚靛酚溶液：称取50 mg 2,6-二氯酚靛酚及50 mg碳酸氢钠溶于50 mL水中。

2.2.7 2％硫脲溶液。

2.2.8 抗坏血酸标准溶液：准确称取20 mg抗坏血酸溶于100草酸溶液中，移入100 mL容量瓶内，并用1％草酸溶液稀释至刻度。混匀，置于冰箱中保存，此溶液每毫升相当于0.2mg抗坏血酸。

2.2.9 抗坏血酸标准使用液：吸取25 mL抗坏血酸标准溶液于50 mL容量瓶中，以1％草酸溶液稀释至刻度，此溶液每毫升相当于100 ug的抗坏血酸。

2.2.10 硫酸奎宁标准溶液：精确称取奎宁10.0 mg，用0.05mol/L硫酸溶解后移入1000mL容量瓶中，并用0.05mol/L硫酸稀释至刻度，此溶液每毫升相当于10 ug奎宁。使用时用0.05 mol/L硫酸配制成每毫升相当于0.1ug奎宁的工作溶液。此溶液用来校正荧光光度计的灵敏度。

2.3 仪器

荧光分光光度计。

2.4 测定步骤

2.4.1 样品处理

精确吸取适量样品，用1％草酸溶液稀释到50 mL，使其抗坏血酸的浓度在(10～100)ug/mL的范围内，摇匀。

2.4.2 测定

吸取抗坏血酸标准使用液5.0mL，置于50 mL容量瓶中。另取上述样品溶液5.0mL，移入另一50 mL容量瓶中。向各容量瓶中逐滴加入2,6-二氯酚靛酚溶液至标准溶液及样品溶液恰好显微红色。再加入2～3滴2％硫脲溶液使红色退去。用水稀释至刻度，摇匀。

取两支20 mL试管，各加入样品溶液2.0 mL，于甲管中加入硼酸-乙酸钠溶液1.0 mL，摇匀，放置15 min(此管为样品空白溶液)。于乙管中加入乙酸钠溶液1.0 mL，摇匀(此管为样品溶液)，另取两支20 mL试管，各加入抗坏血酸标准溶液2.0mL，以下操作与样品溶液相同，以甲管为标准空白溶液，乙管为标准溶液。

于四个试管中各加入邻苯二胺溶液6.0 mL，摇匀后于暗处放置30 min，以365 nm为激发波长，429 nm为发射波长，用0.1 ug/mL硫酸奎宁溶液校正仪器灵敏度，分别测定标准溶液和样品溶液的荧光强度。

3 结果计算和表述

按式(1)计算试样中抗坏血酸的含量：

式中：X—样品中抗坏血酸含量,mg/100 mL;

F₁—样品溶液的荧光强度；

F₂—样品空白的液荧光强度；

F₃—标准溶液的荧光强度；

F₄—标准空白液的荧光强度；

c—抗坏血酸标准溶液浓度，mg/mL ;

V—样品混合液的总体积，mL;

V₁—吸取样品的体积，mL。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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