3.4 测定步骤

3.4.1 提取

称取10g试样(精确至0.1g)于250 mL离心瓶中，加5 mL碳酸钠溶液(1mol/L)和150 mL乙酸乙酯，高速匀浆5 min。再加80 g无水硫酸钠，继续匀浆1 min(低速)。于2500 r/min离心1 min，再将乙酸乙酯层通过滤纸滤入旋转蒸发瓶中。加150 mL丙酮到离心瓶中，再低速匀浆提取2～3 min。将丙酮提取液再通过滤纸滤入旋转蒸发瓶中。用10 mL无水乙醇洗涤滤纸，将洗液并入滤液中。于50℃水浴上旋转浓缩至干。

3.4.2 净化

用10 mL正己烷溶解残渣，将溶液移到125 mL分液漏斗中。用10 mL正己烷洗涤蒸发瓶，洗液并入分液漏斗中。然后用2×10mL磷酸溶液(1 mol/L)洗涤蒸发瓶，洗液全部并入分液漏斗中。剧烈振摇提取2 min，静置10 min，使分层。将下层磷酸溶液转水第二个125 mL分液漏斗中。再用10 mL磷酸溶液(1 mol/L)提取正己烷层两次，将磷酸提取液全部并入第二个分液漏斗中。加10 mL正己烷到磷酸提取液中，振摇洗涤30s。将磷酸提取液放入100 mL的烧杯中，用约9 mL氢氧化钾溶液(10 mol/L)小心地调节pH到8.5(±1.0)。在碱化时，应将烧杯置于冰浴中，并用pH计测pH值。将烧杯中的溶液转入250 mL分液漏斗中，用总量为50 mL的乙酸乙酯分数次洗涤烧杯，洗液全部转入分液漏斗中。剧烈振摇提取2 min，静置分层．将水相放入100 mL烧杯中，然后将乙酸乙酯层通过衬有玻璃棉和约40 g无水硫酸钠的漏斗滤入250 mL旋转蒸发瓶中。将烧杯中的水溶液倒回分液漏斗中，再用50 mL乙酸乙酯如法提取一次。弃去下层水溶液，将乙酸乙酯层通过无水硫酸钠漏斗并入同一旋转蒸发瓶中。用25 mL乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠漏斗，洗液并入蒸发瓶中。置旋转蒸发器上(50℃水浴)将提取液挥发至干。

用3 mL二氯甲烷溶解残渣。用2 mL二氯甲烷预淋硅胶小柱，然后将上述二氯甲烷样液倒入硅胶柱中，用3 mL二氯甲烷洗涤蒸发瓶两次，洗液也倒入硅胶柱中，弃去流出液。以5 mL二氯甲烷洗涤硅胶柱，弃去流出液。用5 mL甲醇-二氯甲烷(1+3)洗脱柱上奥芬达唑，收集洗脱液于试管中。通氮气流将洗脱液挥发至干。准确加入0.5 mL流动相(3.2.12)以溶解残渣，溶液通过0.2 um过滤器过滤后，供HPLC测定。

3.4.3 HPLC测定

3.4.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：Lichrosorb RP-18,25 cm × 0.46 cm(内径)，5 um粒径)，或相当者；

b)保护柱：Lichrosorb RP-18,3 cm × 0.46 cm(内径)，5 um(粒径)，或相当者；

c)HPLC流动相：甲醇-磷酸铁缓冲液(55+45);

d)检测波长：298 nm ;

e)流速：1.0 mL/min;

f)进样量:50 uL。

3.4.3.2 测定

根据样液中被测兽药含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作液和待测样液中奥芬达唑的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准工作液与样液应等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，奥芬达唑的保留时间约为9.0 min。

3.4.4 空白试验

除不称取试样外，均按上述测定步骤进行。

3.5 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中奥芬达唑的残留含量：

式中：X—试样中奥芬达唑残留含量，mg/kg；

h—样液中奥芬达唑的色谱峰高，mm；

h_s—标准工作液中奥芬达唑的色谱峰高，mm；

c—标准工作液中奥芬达唑的浓度，ug/mL;

V—样液最终定容体积，mL；

m—最终样液所代表的试样量，g。

注：计算结果需将空白值扣除。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为0.02mg/kg。

4.2 回收率

猪肉中奥芬达唑的添加浓度及其回收率的实验数据：

0.02 mg/kg时，回收率为89.0％；

0.10 mg/kg时，回收率为92.4％;

1.00 mg/kg时，回收率为96.6％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。