4.5 测定步骤

4.5.1 样液制备

4.5.1.1 肉类、水产品、动物内脏：用肉类榨汁器榨汁，取大约250 uL汁液作为待测样液。

4.5.1.2 蛋：取禽蛋液体至清洁容器中，均质后直接取样。

4.5.1.3 牛奶：直接取样。

4.5.2 菌悬液的制备

一般情况下，菌种的传代、次数不应超过5代，否则在每次使用前确证其生化特性没有发生变异，或另需购置新的标准菌株。在确定保存的菌种生化特性没有改变后，将复活的菌种分别接种于盛有增菌固体培养基的克氏瓶中，55℃±1℃培养72 h镜检芽孢数达80％以上(如果达不到，可再培养数日，芽袍数量仍达不到要求,菌种可能变异，不可使用)，用灭菌生理盐水洗下菌苔，使其悬浮于生理盐水中，80℃水浴加热30 min，2000g离心20 min，弃上清液，用灭菌生理盐水重复洗涤芽孢两次。然后用灭菌生理盐水制成菌悬液，用稀释平板计数的方法或比浊法进行菌体计数以确定菌悬液的浓度，菌悬液中菌体细胞的含量应达到1.0×10⁸ CFU/mL。置2℃～8℃冰箱保存，贮存期1个月。

4.5.3 检定安瓿的制备

将嗜热脂肪芽袍杆菌菌悬液加人到融化后冷却至60℃左右的灭菌检定培养基中，充分混匀，使培养基中嗜热脂肪芽孢杆菌的浓度达到1.0×10⁶ CFU/mL。在灭菌安瓿中加入1 mL混合液，保持水平待其凝固。取制备好的检定安瓿，加人100uL 0.05 ug/mL泰乐菌素标准工作液，室温放置20 min后，64℃±1℃培养3 h～4 h。琼脂培养基颜色不变色，仍呈现紫色的安瓿为合格，达不到要求的安靓应弃去。制备好的安瓿置2℃～8℃冰箱可保存1周。

4.5.4 测定

取制备好的检定安瓿，其中一个加入100uL 0.05 ug/mL泰乐菌素标准工作液作为阳性对照，一个加入100uL阴性样品样液作为阴性对照。吸取100 uL待测样液加入检定安瓿中，将安靓放置室温，20 min预扩散；对于蛋、鱼、肾脏样品，预扩散后，需置于80℃水浴加热10 min。预扩散后，用蒸馏水洗涤安瓿两次，洗去待测样液，去除安瓿内剩余的水，用铝箔纸封住安瓿。将安瓿置于培养箱中，64℃±1℃培养3h～4h，直到阴性对照安瓿颜色变为黄色时停止培养。取出安瓿，根据安瓿内固体琼脂底部的三分之二部分的颜色判定结果。

4.6 检测结果判断和报告

如果待测样液安瓿内琼脂底部三分之二部分由紫色变为黄色，阳性对照安瓿内琼脂底部三分之二部分仍呈现紫色，即报告“阴性”。如果待测样液安靓和阳性对照安瓿内琼脂底部三分之二部分仍呈现紫色，即报告“初筛阳性”。

初筛阳性的样品可进一步用β-内酰胺酶排除β-内酰胺类药物，P-氨基苯酸排除磺胺类药物的可能。

阳性样品需要用确证方法进行定性和定量分析。

5 检测限

检测限见表1。

表1检测限

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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