1 范围

本标准规定了进出口动物源食品中肝、肾和肌肉中19-去甲睾酮残留量的测定方法。

本标准适用于动物源食品中肝、肾和肌肉中19-去甲睾酮残留量的测定。

2 测定方法

2.1 方法提要

动物组织中目标化合物在缓冲液中经酶水解后用甲醇提取，正己烷去脂，提取液经C₁₈小柱净化，衍生化反应后，用气相色谱-质谱联用仪测定，外标法定量。

2.2 试剂和材料

除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2.2.1 β-葡糖醛酸糖昔酶:100 U/mL。

2.2.2 冰乙酸。

2.2.3 乙酸钠。

2.2.4 甲醇。

2.2.5 正己烷：优级纯。

2.2.6 乙醚。

2.2.7 氢氧化钠。

2.2.8 异辛烷：优级纯。

2.2.9 七氟丁酸酐。

2.2.10 1 mol/L氢氧化钠溶液：溶解40 g氢氧化钠于1L水中。

2.2.11 乙酸盐缓冲溶液(0.2 mol/L, pH=5.2±0.2);16.4g乙酸钠溶于900 mL水中，用冰乙酸调节pH值至5.2±0.2，再用水定容到1 L。

2.2.12 19-去甲睾酮标准品，纯度≥99％。

2.2.13 19-去甲睾酮标准溶液：准确称取适量的19-去甲睾酮标准品，用甲醇酐制成浓度为100 ug/mL标准储备溶液。根据需要再用甲醇将标准溶液稀释成适用浓度的标准工作液。

2.3 仪器和设备

2.3.1 气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)。

2.3.2 高速匀质器。

2.3.3 离心机：4000r/min。

2.3.4 涡旋混合器。

2.3.5 旋转蒸发仪。

2.3.6 C₁₈固相萃取小柱：500 mg，依次用5 mL甲醇和5 mL水活化，备用。

2.3.7 氮吹仪。

2.3.82 mL带螺旋帽盖的衍生化小瓶(配聚四氟乙烯内衬密封垫)。

2.4 测定步骤

2.4.1 样品的制备

从所取全部动物组织样品中取出有代表性样品约1 kg，充分绞碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封作为试样，标明标记。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

2.4.2 酶解

从试样中准确称取10g(精确到0.01g)于50 mL塑料离心管中，加10 mL乙酸盐缓冲液(2.2.11)，均质，再加50 uL β-葡糖醛酸糖苷酶，充分混匀，混合物在37℃保温18 h。

2.4.3 提取、净化

样品酶解后加30 mL甲醇，混合2 min，在60℃水浴中放置15 min，放入-18℃的冰箱中2 h～3 h。以3500r/min速度离心5 min，将上清液轻轻地倒入另-50 mL塑料离心管中，用10 mL正己烷萃取上清液两次，正己烷层弃去。剩余溶液倒入100 mL锥型烧瓶中，在40℃水浴中旋转蒸发除去甲醇。剩余溶液全部上样到C₁₈固相萃取小柱，抽干，用13 mL正己烷＋乙醚溶液(30+70)将目标化合物洗脱并收集。洗脱液经氮气浓缩到7 mL左右，加1 mol/L的氢氧化钠1 mL，在涡旋混合器上振荡2 min，再以2 000 r/min速度离心，将有机层转移到另一个试管中，在40℃水浴下用缓慢的氮气流吹至近干。

2.4.4 衍生化

将上述试管中残留物用洗脱液完全转移到2 mL的衍生瓶中(2.3.8)，继续用氮气吹干，加100 uL异辛烷和50 uL七氟丁酸酐，振荡，于80℃的恒温箱中反应30 min，取出后冷却至室温，再用氮气流于40℃水浴中吹干，加200 uL的异辛烷振荡溶解，供气相色谱-质谱分析。

2.4.5 19-去甲睾酮标准工作溶液的制备

准确吸取一定量适用浓度的19-去甲睾酮标准溶液(2.2.13)于带螺旋帽盖的衍生化小瓶中(2.3.8)，用氮气流于40℃水浴中吹干，按2.4.4操作进行衍生化。

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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