1 范围

本标准规定了蜂王浆和王浆冻干粉中泰乐菌素残留量的酶联免疫测定方法。

本标准适用于蜂王浆和王浆冻干粉中泰乐菌素残留量的测定。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达感协华的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)

3 方法提要

本标准以酸性的庚烷磺酸钠缓冲液来提取蜂王浆中残留的泰乐菌素，沉淀王浆中蛋白后并调节pH到7.0。处理后样品中残留的泰乐菌素与酶标记泰乐菌素共同竞争结合至包被在微孔板上的绵羊抗兔抗体，通过洗涤除去未结合的泰乐菌素和酶标记泰乐菌素，然后加入底物显色，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出试样中泰乐菌素的含量。

4 试剂和材料

除注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 泰乐菌素检测试剂盒。

4.2 庚烷磺酸钠缓冲液：称取10.1g庚烷磺酸钠[CH₃(CH₂)₆SO₃Na], 11.4g磷酸钠(Na₃PO₄·12H₂O)用水溶解并定容到1L，用磷酸调节pH至2.0。

4.3 磷酸盐缓冲液：称取磷酸钠(Na₂HPO₃·12H₂O)34g，用水溶解并定容到1L调节pH至8.0。

4.4 HLB小柱，Oasis(或相当产品)，3 mL(60 mg)。

4.5 泰乐菌素标准品：纯度大于等于98%。

4.6 泰乐菌素标准品溶液的配制：用甲醇作为溶剂配制成400 ug/mL的储存液，于-20℃条件上保存。

5 仪器和设备

5.1 酶标仪。

5.2 八道移液器：10uL～100uL。

5.3 单道移液器：10uL～100uL,100uL～1000uL和2 mL～10 mL。

5.4 混合振荡器。

5.5 高速低温离心机：6 000 r/min。

5.6 具塞试管：50 mL。

5.7 电子天平：0.01g～100g。

5.8 酸度计。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

原始样品总量不得少于200 g，蜂王浆充分搅拌均匀后，将样品分成两等份；冻干粉采用四分法，将样品分成两等份。分好的样品装入洁净容器，加封并做标识。

6.2 试样的保存

将样品于-20℃～-18℃条件下保存。

7 分析步骤

7.1 提取

称取2.0g蜂王浆样品，置于50 mL具塞试管中，加入6 mL庚烷磺酸钠缓冲液(4.2)，充分振荡，15℃条件下6000r/min离心10 min，取0.5 mL上清液于一干净试管，加入0.5 mL磷酸盐缓冲液(4.3),混合均匀，调节pH至6.8～7.2，此溶液即可供ELISA检测用。最后样品稀释倍数为8。王浆冻干粉则用水以1:2比例稀释，充分浸泡(2 h以上)后，称取2.0g按照上述王浆前处理方法进行提取，最后稀释倍数为24。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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