1 范围

本标准规定了动物源性食品中β-内酰胺类药物残留检测的试样制备、保存和微生物抑制检测方法。

本标准适用于牛奶、肉类、鱼和虾中的苄青霉素、氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素、苯唑青霉素和头孢噻呋等药物残留筛选检测，阳性结果应用其他方法进行确证。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 试样制备和保存

3.1 试样制备

3.1.1 牛奶：取不少于500 mL试样，装入清洁容器内，并标明标记。

3.1.2 肉类、鱼和虾：从原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入高速捣碎机均质，充分混匀，用四分法缩分不少于500 g试样。装入清洁容器内，并标明标记。

3.1.3 制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

3.2 试样保存

3.2.1 牛奶：0℃～4℃保存。

3.2.2 肉类、鱼和虾：试样于-18℃以下保存，新鲜或冷冻组织样品可在2℃～6℃保存72 h。

4 测定方法

4.1 方法提要

试样经缓冲液提取、温育和离心后，取上清液进行测定。利用抗生素对敏感菌的抑制作用来判别试样中是否含有抗生素。

4.2 设备和材料

4.2.1 恒温箱：63℃±1℃。

4.2.2 离心机。

4.2.3 高速组织捣碎机。

4.2.4 恒温水浴锅：80℃。

4.2.5 涡旋振荡器。

4.2.6 显微镜：10×～100×。

4.2.7 游标卡尺：测量范围0 mm～200 mm，精度0.02mm或抑制圈测量仪。

4.2.8 灭菌平皿：直径90 mm，底部平整的玻璃或一次性塑料灭菌平皿。

4.2.9 圆形滤纸片：直径10 mm，厚1.1 mm。日本Toyo Roshi Kaisha, Ltd．产品或同类产品。

4.2.10 克氏瓶。

4.2.11 可调移液器：10 uL～100uL，100uL～1000uL。

4.3 菌种和培养基

4.3.1 菌种

嗜热脂肪芽孢杆菌Bacillus stearothermophilus。philus ATCC10149。

4.3.2 培养基

4.3.2.1 细菌保存培养基。

4.3.2.2 菌种芽饱培养基。

4.3.2.3 检定培养基。

4.4 试剂

除非另有说明，本标准所用化学试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T 6682的规定。

4.4.11.0 mol/L盐酸溶液

量取90 mL浓盐酸用蒸馏水稀释至1000 mL。

4.4.2 1.0 mol/L氢氧化钠

准确称取4.0g氢氧化钠，溶解于100 mL蒸馏水中。

4.4.3 缓冲液

4.4.3.1 pH6.0磷酸盐缓冲液：称取8.0g磷酸二氢钾(KH₂PO₄)及2.0g磷酸氢二钾(K₂HPO₄·3H₂O)，用蒸馏水溶解并定容至1 000 mL,121℃高压灭菌15 min。

4.4.3.2 磷酸盐缓冲液-丙酮

磷酸盐缓冲液-丙酮：按体积比pH6.0磷酸盐缓冲液：丙酮=1：1比例制备。

4.4.4 抗生素标准液

4.4.4.1 标准品：苄青霉素，纯度≥99%。

4.4.4.2 苄青霉素标准储备液：准确称取适量的苄青霉素标准品，用灭菌pH6.0磷酸盐缓冲液(4.4.3.1)溶解并定容至1000 ug/mL，置2℃～8℃冰箱保存，贮存期7 d。

4.4.4.3 苄青霉素标准工作液：吸取适量的苄青霉素标准储备液，用pH6.0磷酸盐缓冲液(4.4.3.1)稀释成0.005 ug/mL的标准工作液，应当日配制使用。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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