6 仪器

6.1 酶标仪：具450 nm波长。

6.2 8道移液器：10 uL～100 uL。

6.3 单道移液器：10 uL～100uL,20 uL～200uL,100uL～1000uL和2 mL～10 mL。

6.4 高速低温离心机：8000r/min。

6.5 电子天平：感量0.1 mg。

6.6 氮吹仪。

6.7 组织捣碎机。

6.8 漩涡混合器。

7 分析步骤

7.1 提取

称取5.0 g样品(精确到0.1g)，置于50 mL具盖聚丙烯酸离心管中，加入20 mL乙腈(5.2)和0.5 mL 40%氢氧化钠溶液(5.3) ,漩涡混合2 min，超声提取10 min。6000r/min离心5 min，吸取2 mL上清液于干净试管，氮气吹至将干(注意不能吹干)，用样品稀释缓冲液(试剂盒提供)定容到1.0 mL，即可供ELISA检测用。最后稀释倍数为2。

7.2 测定条件

7.2.1 酶标仪测定条件

酶标仪测定波长为450 nm。

7.2.2 洗板条件

人工洗涤次数5次，每次加入洗涤液量为250uL。自动洗板可以预定5次周期。

7.2.3 操作条件

所有操作应在室温下(20℃～25℃)进行，试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温(20℃～25℃)后方可使用。

7.3 测定步骤

7.3.1 将测定需用的微孔板备齐并插入微孔架上，记录标准溶液及样品提取液等在微孔架上的位置。测定中吸取不同的试剂和样品溶液时应更换吸头。

7.3.2 吸取50 uL稀释缓冲液于孔A1、A2；分别吸取50 uL氯丙嗪标准溶液(浓度分别为：0.05、0.1、0.2、0.3、0.6、1.25和2.5 ng/mL)于孔B1、B2-H1、H2；吸取50uL样品溶液于其余微孔中。

7.3.3 分别吸取100 uL酶标记物溶液于每一个微孔。

7.3.4 用封口膜封孔条，并持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀，室温(20℃～25℃)避光孵育10 min。

7.3.5 倒出孔中的液体，将微孔架反扣在吸水纸上反复拍打，以除去孔中过多的残液，但不能使微孔干燥，然后立即用洗涤缓冲液按7.2.2条件进行洗板。

7.3.6 迅速加入100 uL底物溶液于每一个微孔，然后持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后，于室温(20℃～25℃)避光孵育10 min。

7.3.7 加入100uL反应终止液于每一个微孔，混匀后将微孔架置于酶标仪中，在450 nm处测量吸光度(应在加入反应终止液30 min内读取吸光度)。

7.4 平行试验

按以上步骤，对同一标准溶液、同一样品溶液均应进行平行试验测定。

7.5 空白试验

除不称取试样外，均按上述步骤进行。

7.6 质控试验

每次测定均应做一个用空白样品添加混合标准(5.5.3)的质控样品测定，以确定检测过程的准确性，添加浓度为相应产品的检测低限。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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