4 仪器和设备

4.1 液相色谱仪：配紫外检测器。

4.2 液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源。

4.3 分析天平：感量为0.1mg和0.01g。

4.4 组织捣碎机。

4.5 涡旋振荡器。

4.6 均质机。

4.7 离心机：3 500 r/min,

4.8 旋转蒸发仪。

4.9 固相萃取装置。

4.10 具塞离心管：50 mL，塑料。

5 试样的制备和保存

5.1 动物肌肉、肝脏

从原始样品中取出代表性的样品500 g，用组织捣碎机捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样放于-18℃以下保存。

5.2 蛋

从原始样品中取出代表性的样品500 g，去除蛋壳后，用组织捣碎机捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样放于0℃～4℃保存。

制样操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。

6 测定步骤

6.1 提取

称取5g试样(精确到0.01g)于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈，0.2 mL 50％氢氧化钾溶液(3.13)和3g无水硫酸钠，均质30 s，3500r/min离心5 min，上清液转移到25 mL容量瓶中，残渣加入10 mL 乙腈和0.2mL 50%氢氧化钾溶液，涡旋振荡提取2 min, 3500r/min离心5 min，合并上清液，用乙腈定容至刻度，待净化。

6.2 净化

6.2.1 液液分配

移取10.0mL提取液(6.1)于25 mL浓缩瓶中，加入5 mL乙腈饱和正己烷(3.8)，涡旋振荡，静置分层，弃去上层。再加入5 mL乙腈饱和正己烷，重复操作。

6.2.2 双硝基均二苯脲测定

移取2.0mL分配液(6.2.1)于40℃下旋转蒸发至近干，用乙腈溶解残渣，定容至2.0mL，过0.20 um滤膜，供液相色谱测定，或移取1.0 mL滤液，加入0.5 mL氘代双硝基均二苯脲标准中间溶液(3.24)，用甲醇-0.1％乙酸水溶液(3.14)定容至10.0 mL，供液相色谱-质谱/质谱测定。

6.2.3 双咪苯脲测定

移取5.0 mL分配液于已活化、平衡处理的固相萃取柱中(3.29)，控制流速小于0.5 mL/min，依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，15 mL 5％乙酸甲醇溶液(3.12)洗脱，控制洗脱液流速小于1.0 mL/min。洗脱液转移到50 mL浓缩瓶，40℃下旋转浓缩至近干，用水溶解残渣，定容至2.0 mL，过0.20 um滤膜，供液相色谱测定，或移取1.0 mL滤液，用水定容至10.0mL，供液相色谱-质谱/质谱测定。

6.3 空白样品提取溶液制备

称取5g空白样品，按6.1、6.2.1和6.2.3操作进行到水定容至2.0 mL，过0.20 um滤膜，得到滤液作为空白样品提取溶液。

6.4 液相色谱测定

6.4.1 色谱条件

a)色谱柱：Discovery C₁₈柱，250 mm×4.6(内径)mm, 5 um，或相当者；

b)流动相：测定双硝基均二苯脲为乙腈-1％乙酸水溶液(53+47，体积比)；测定双咪苯脲为乙腈-1％乙酸水溶液(10+90，体积比)；

c)流速：1.0 mL/min;

d)检测波长：测定双硝基均二苯脲为350 nm；测定双咪苯脲为260 nm；

e)柱温：35℃；

f)进样量：20 uL。

6.4.2 色谱测定

根据样液中待测物的含量情况，选取响应值相近的标准工作溶液进行色谱分析，标准工作溶液和待测样液中双硝基均二苯脲及双咪苯脲的响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工住溶液和样液等体积参插进样测定。

6.5 液相色谱-质谱/质谱测定

6.5.1 色谱条件

a)色谱柱：SunFire C₁₈,100 mm×2.1(内径)mm, 3.5 um，或相当者；

b)流动相：测定双硝基均二苯脲为甲醇=0.1％乙酸水溶液(75+25，体积比)；测定双咪苯脲为甲醇-0.1％乙酸水溶液(10+90，体积比)；

c)流速：0.25 mL/min；

d)柱温：35℃：

e)进样量：测定双硝基均二苯脲为5 uL；测定双咪苯脲为10uL。

6.5.2 质谱条件

a)离子源：电喷雾离子源(ESI);

b)扫描方式：测定双硝基均二苯脲为负离子扫描；测定双咪苯脲为正离子扫描；

c)检测方式：多反应选择离子检测(MRM);

d)电喷雾电压(IS):测定双硝基均二苯脲为-4500V：测定双咪苯脲为5500V;

e)雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；

f)辅助气温度(TEM) : 500℃；

相关链接：进出口动物源性食品中二苯脲类残留量检测方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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