4 检验方法

4.1 方法提要

将测试样品经缓冲液提取、温育和离心后，取上清液进行测定。利用抗生素对敏感菌的抑制作用来判别试样中是否含有甲砜霉素和氟甲砜霉素类抗生素。

4.2 试样制备和保存

4.2.1 试样制备

肉、鱼和虾：从原始样品中取出部分有代表性样品，取250 g可食部分放入高速组织捣碎机均质，充分混匀，装入清洁容器内，并标明标记。牛奶同批次直接从三个独立包装各取100 mL混合均匀。装入清洁容器内，并标明标记。
测试样品制备操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

4.2.2 试样保存

肉、鱼、虾：试样于-18℃以下保存，牛奶2℃～8℃保存。

4.3 菌悬液制备

将藤黄微球菌ATCC9341菌种用普通营养肉汤培养基复活，接种血平板分离出单个菌落，挑取单个菌落接种纯化及传代培养基(TSA)斜面，37℃培养18 h～24 h。取斜面菌苔制成0.5麦氏单位菌悬液备用。

4.4 检定用藤黄微球菌ATCC9341平板制备

无菌吸取0.5 mL 0.5麦氏单位藤黄微球菌悬液注入灭菌平皿内，加入8 mL溶化后冷却至50℃左右灭菌抗生素培养基1号(AMI)培养基，充分混匀后保持水平使其凝固，放置42℃温箱中烘干15 min备用，所用检定平板应当天制备。

4.5 测定步骤

4.5.1 样液提取

称取10.0g均质好的试样手50 mL离心管中，加入20 mL PH6.0磷酸盐缓冲液-乙腈提取液，用涡旋振荡器充分振荡3 min，于65℃～70℃水浴保温30 min后，3 000 r/min离心15 min取上清液作为样液，牛奶样品直接取样。

4.5.2 测定

取制备好的检定用平板各两个，在平板底部做好标记，把滤纸片适当间隔置于平板上，每个平板最多不超过4个，用镊子轻压使其固定，在每片滤纸上滴加100 uL样液或标准工作液，静置30 min后，置37℃培养18h后观察，用游标卡尺测量抑菌圈直径大小，每份样品做两个平板平行样试验。

4.6 检测结果判定和报告

4.6.1 检定平板上待测样品不产生抑菌圈或抑菌圈直径≤10 mm，标准工作液的抑菌圈＞14 mm，报告未检出甲砜霉素、氟甲砜霉素。

4.6.2 检定平板上待测样品产生抑菌圈，抑菌圈直径≥12 mm，标准工作液的抑菌圈＞14 mm，报告初筛检出甲砜霉素、氟甲砜霉素。

4.6.3 检定平板上待测样品产生抑菌圈：10 mm＜抑菌圈直径≤12 mm，标准工作液的抑菌圈>14 mm，判为可疑，必要时重新取样检测。第二次检测结果为阳性或可疑时，报告初筛检出甲砜霉素、氟甲砜霉素，为阴性时，报告未检出甲砜霉素、氟甲砜霉素。

5 检测限

5.1 肉类、鱼和虾样品：

—甲砜霉素50 ug/kg;

—氟甲砜霉素100 ug/kg.

5.2 牛奶样品：

—甲砜霉素20 ug/kg;

—氟甲砜霉素50 ug/kg。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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