7 测定步骤

7.1 样品提取

7.1.1 肌肉、鱼肉、肝脏、肾脏、虾和蟹

称取均质试样2g(精确到0.1g)，置于10 mL具螺旋盖聚丙烯离心管中，加入6 mL 5％三乙胺的乙腈-水溶液(4.5)。肌肉和鱼肉样品均质提取2 min；肝脏、肾脏、虾和蟹样品旋涡混合1 min，超声提取5 min, 3000 r/min离心5 min，收集上清液于一具刻度离心管中。离心后的残渣用约6 mL 5％三乙胺的乙腈-水溶液(4.5)重复上述提取步骤1次，合并上清液，混匀。

7.1.2 牛奶

称取均质试样2g(精确到0.01g)，置于10 mL具刻度螺旋盖聚丙烯离心管中，加入10mL 5％三乙胺的乙腈-水溶液，旋涡混合1 min，超声提取5 min, 5000r/min离心5 min，收集上清液于一具刻度离心管中。

7.2 固相萃取净化

将7.1中所得提取溶液转入经过预处理的MAX固相萃取柱中(4.14)，以约1滴/s流速使样品溶液全部通过固相萃取柱，弃去流出液。依次用5 mL 5％氨水溶液(4.8),5 mL甲醇、5 mL 2％甲酸的甲醇-水溶液(4.10)淋洗，淋洗液完全通过小柱后，弃去流出液，用真空泵抽干固相萃取柱5 min以上。以4mL 4％甲酸甲醇溶液(4.9)洗脱，洗脱液用干净的15 mL具刻度试管收集，40℃水浴下吹氮浓缩至1 mL，用水定容至2 mL，混匀。溶液以0.22 um有机滤膜过滤，滤液可直接供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈,1.8 um, 50×2.1 mm(内径)，或相当者；

b)流动相：甲醇+5 mmol/L乙酸铵溶液，梯度洗脱(梯度时间表见表1);

表1 液相色谱的梯度洗脱条件

c)流速：250 uL/min;

d)柱温：30℃；

e)进样量：30 uL。

7.3.2 质谱条件

a)离子化模式：电喷雾电离负离子模式(ESI-);

b)质谱扫描方式：多反应监测(MRM);

c)分辨率：单位分辨率；

d)定量离子对：262.7>262.7，定性离子对：264.7>264.7、266.7>266.7、268.7>268.7。

7.3.3 液相色谱-质谱/质谱仪测定

根据样液中被测化合物的含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中待测化合物的响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参差进样测定。

8 结果计算与表述

8.1 定性测定

选择4对母离子进行MRM监控，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间偏差在±2.5％之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。

表2 定性时相对离子丰度的最大允许偏差

8.2 定量测定

在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标，基质混合工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，如果超出仪器线性响应范围，应用空白基质溶液进行适当稀释。

8.3 结果计算与表述

采用外标法定量，按式(1)计算五氯酚残留量。计算结果需扣除空白值。

式中：

X—试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(ug/kg);

c—从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每升(ug/L) ;

V—样品溶液最终定容体积，单位为毫升(mL);

m—最终样品溶液所代表的试样质量，单位为克(g)。

9 测定低限与回收率

9.1 测定低限

本方法对五氯酚的测定低限为1.0ug/kg。

9.2 回收率

猪肉、猪肝、猪肾、牛奶、鱼肉、虾、蟹中五氯酚的回收率数据见表3。

表3 五氯酚残留的添加回收率试验数据

相关链接：进出口动物源食品中五氯酚残留量检测方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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