8 测定步骤

8.1 试剂的制备

8.1.1 复溶工作液

提供的复溶工作液为2×浓缩液。使用前用蒸馏水将复溶工作液稀释2倍使用。

8.1.2 洗涤液

提供的洗涤液为20×浓缩液。使用前用蒸馏水将浓缩洗涤液稀释20倍使用。

8.2 样品检测

往酶标板里加标准品/样本50uL孔，再加入50uL/孔的抗体工作液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，置于温育培养箱中37℃反应30 min。取出用洗涤液按每孔250 uL，洗板4次～5次，每次浸泡10s，拍于(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。加入酶标二抗工作液100 uL孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，置于温育培养箱中37℃反应30 min，取出重复洗板步骤。每孔加入底物A液50 uL，再加B液50uL，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，于温育培养箱中37℃避光显色15 min。每孔加入浓度为 2 mol/L的终止液50 uL，轻轻振荡混匀。于450 nm处测定吸光度值(OD值)(建议用双波长450/630 nm检测，加入终止液后在5 min内读完结果)。

9 结果的计算

标准品和样品的百分吸光度值计算方法见式(1)：

式中：

B—标准品或样品的百分吸光度值；

B₀—0标准的百分吸光度值。

以百分吸光度值为纵坐标，玉米赤霉醇标准溶液的浓度(ng/kg)的半对数值为横坐标绘制标准工作曲线。从标准曲线上得到试样中相应的玉米赤霉醇浓度后，结果按式(2)进行计算：

式中：

X—样品中玉米赤霉醇的含量，单位为微克每千克(ug/kg);

A—样品的相对吸光度值对应的玉米赤霉醇的含量，单位为微克/升(ug/L);

f—样品稀释倍数；

m—样品的取样量，单位为克(g)。

也可用各种酶标仪的数据处理软件进行计算。所得结果表述到小数点后两位。

如被测试样中玉米赤霉醇残留量的值大于限量要求时，应用其他方法进行确证。

10 检测灵敏度、检测低限、回收率

10.1 检测灵敏度

本方法检测灵敏度为0.1 ug/kg。

10.2 检测低限

本方法检出低限为0.5 ug/kg。

相关链接：进出口动物源性食品中玉米赤霉醇残留量的检测方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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