5 仪器

5.1 Charm Ⅱ 7600分析仪或相当者。

5.2 孵育器。

5.3 离心机。

5.4 均质器。

5.5 移液器：10 uL～100uL,100uL～1000uL和2 mL～10mL。

5.6 涡旋混合器。

5.7 电子天平：0.01g～100g。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

原始样品总量不得少于500 g，采用四分法，将样品分成两等份装入洁净容器，加封并做标识。

6.2试样的保存

将样品于-20℃～18℃条件下保存。

7 分析步骤

7.1 提取

称取10.0g蜂王浆样品置于50 mL离心管中，加20 mL甲醇水溶液(4.9)，在涡旋混合器进行混合，6000r/min离心10 min，取上清液置于另一支试管中。用pH试纸测试上清液的pH值，如果pH值小于7.0，以氢氧化钠溶液(4.10)调pH直至6.5～7.5；然后在3300r/min条件下离心5 min，上清液为待测溶液。

7.2 测定

7.2.1 从试剂盒中取出试剂片，用试剂盒中所附压杆将白色受体药片(4.1.5)推出到试管中，用移液器取300uL，水至样品试管中，用涡旋混合器混合10s将药片打碎。加入4.5 mL组织萃取缓冲液(4.4)和0.5 mL样品待测液；阴性和阳性对照管中则直接加入5 mL阴性对照液(4.7)和5mL阳性对照液(4.8)。

7.2.2 将橙色四环素氘标记药片(4.1.6)推至上述3支试管中，用涡旋混合器混合10 s。

7.2.3 将试管置于35℃±1℃的孵育器保温5 min。

7.2.4 取出试管，在3300r/min条件下离心5 min，立即弃去上清液，用吸水纸将测试管边缘的水渍吸干。加300uL水，用试管混合器混合10s将沉淀物打碎。

7.2.5 分别加3 mL闪烁液(4.6)至试管中，加盖，混匀，放置1 min，在Charm Ⅱ 7600分析仪上以[3H]频道上进行一分钟计数cpm。

8 结果判定

8.1 控制点的确定

8.1.1 控制点是界定样品阴性与初筛阳性的一个界限值，对于同一批号的试剂盒，正常情况下只需测定一次控制点。

8.1.2 控制点(金霉素10 ug/kg，相对应：四环素10 ug/kg，土霉素10 ug/kg，强力霉素10 ug/kg)设置如下：称取10.0g空白基样(4.12)蜂王浆，加入100 uL MSU多抗生素标准品溶液(4.3)；按照7.1进行前处理，再按7.2进行测试。取该6个加标样品平行测试的cpm读数平均值，乘以系数1.1作为筛选测定的控制点。还可根据所需的筛选水平重新设置相应的控制点。

8.2 结果判定

当样品测定cpm值大于控制点，可判定为样品“阴性”，即样品中四环素类抗生素残留小于筛选水平；若测定cpm值小于或等于控制点，应判定为阳性，应使用仪器方法进一步进行确证分析。

9 确证试验

如被测样品中四环素类抗生素残留量的值大于限量要求时，应用其他方法进行确证。

10 本标准的方法检出限

四环素、金霉素、土霉素和强力霉素残留总量10 ug/kg。

相关链接：蜂王浆中四环素类抗生素残留量测定方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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