3.4 测定步骤

3.4.1 提取

称取试样约20.0g(精确至0.1g)于250 mL分液漏斗中，加入甲醇-乙腈100 mL，用振荡器激烈振荡30 min,静置，提取液经上敷1 cm厚的硅藻土的滤斗抽滤。将滤纸上的残渣移回分液漏斗，加入50 mL甲醇-乙腈，与上述同样操作。将滤液合并于1 000 mL分液漏斗中。加入氯化钠溶液300 mL及二氯甲烷100 mL,激烈振荡5 min，静置。分取二氯甲烷层于250 mL锥形瓶中。在水层中再加入二氯甲烷100 mL，与上述同样操作，分取二氯甲烷层合并于上述锥形瓶中。于锥形瓶中加入适量无水硫酸钠，振摇，放置30 min后，过滤于梨形瓶中。用二氯甲烷20 mL洗涤锥形瓶，再用此洗液洗涤滤纸上的残渣。将洗液合并于梨形瓶中，于40℃蒸去二氯甲烷。

用20 mL丙酮溶解残留物，加入凝聚剂50 mL及硅藻土2g，轻轻摇匀后，放置5 min。此溶液抽滤到250 mL分液漏斗中(此漏斗的滤纸上上敷1 cm厚硅藻土)。然后用丙酮-凝聚剂50 mL洗涤上述梨形瓶。再用此溶液洗涤滤纸上的残渣，抽滤，滤液合并于上述分液漏斗中。加入二氯甲烷50 mL，激烈振荡5 min，静置。分取二氯甲烷层于250 mL锥形瓶中。在水层中加入二氯甲烷50 mL，与上述同样操作，分取二氯甲烷层合并于上述锥形瓶中，在锥形瓶中加入适量无水硫酸钠，振摇后，放置30 min，过滤于梨形瓶中。然后用二氯甲烷20 mL洗涤锥形瓶，再用此洗液洗涤滤纸上的残渣，洗液合并于梨形瓶中，于40℃蒸去二氯甲烷。用5 mL苯溶解残留物。

3.4.2 乙酰化

于上述溶液中加入吡啶1 mL及乙酸配1 mL，加塞，于80℃加热30 min，并不断振摇。冷却后，加入氯化钠溶液50 mL及乙酸乙酯50 mL，移入250 mL分液漏斗中。加入盐酸溶液10 mL，用振荡器激烈振荡混匀，静置，分取乙酸乙酯层于另一250 mL分液漏斗中。加水50 mL，激烈振荡5 min，混匀，静置。分取乙酸乙酯层于250 mL锥形瓶中。在锥形瓶中加入适量无水硫酸钠，摇匀，放置30 min，过滤于梨形瓶中。然后用乙酸乙酯20 mL洗涤锥形瓶，再用此溶液洗涤滤纸上的残渣，将洗液合并于梨形瓶中。加入0.1 mL二甘醇-丙酮。于40℃蒸去乙酸乙酯。残留物用10 mL乙酸乙酯-正己烷(1+24)溶解。

3.4.3 净化

在内径15 mm、长300 mm的柱中装入弗罗里硅土10g，上面覆盖5 g无水硫酸钠，然后注入经脱水的乙酸乙酯-正己烷(1+24)使液面高于无水硫酸钠层表面。将乙酰化溶液注入柱中，再注入乙酸乙酯-正己烷(1+24)80 mL，弃去流出液。然后用乙酸乙酯-正己烷(1+9)80 mL进行洗脱，收集洗脱液于梨形瓶中。加入0.1 mL二甘醇-丙酮溶液，于40℃蒸去乙酸乙酯及正己烷。用10 mL正己烷溶解残留物，溶液供气相色谱测定。

3.4.4 标准工作溶液的乙酸化

移取10 mL适当浓度的杨菌胺标准工作溶液，按3.4.2进行乙酰化，操作到蒸去乙酸乙酯。残留物用10 mL正己烷溶解。

3.4.5 测定

3.4.5.1 色谱条件

a)色谱柱：玻璃填充柱，1 m×3 mm(内径)，填充物为1.5％(m/m)OV-17涂于Chromosorb WAW-DMCS(80～100目)；

b)载气：氮气，纯度≥99.99%,50 mL/min;

c)色谱柱温度：195℃；

d)进样口温度：260℃;

e)检测器温度：280℃;

f)进样量：2 uL。

3.4.5.2 色谱测定

根据样液中杨菌胺含量情况，选定峰高相近的乙酰化后标准工作溶液。乙酸化后标准工作溶液和样液中杨菌胺乙酰化物响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，杨菌胺乙酰化物的保留时间约为5 min。

3.4.6 空白试验

除不称取试样外，均按上述测定步骤进行。

3.4.7 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中杨菌胺残留含量：

式中：X—试样中杨菌胺残留含量，mg/kg;

h—样液中杨菌胺乙酰化物的色谱峰高,mm;

h_s—标准工作液中杨菌胺乙酰化物的色谱峰高，mm;

c—标准工作液中杨菌胺浓度，ug/mL;

V—样液最终定容体积，mL ;

m—最终样液所代表的试样量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法测定低限为0.04mg/kg。

4.2 回收率

杨菌胺添加浓度及其回收率的实验数据：

在0.04 mg/kg时，回收率为83.8％;

在0.10 mg/kg时，回收率为89.0％;

在0.20 mg/kg时，回收率为95.8％。

文章来源：《食品化妆品检验卷农药残留检测方法上》

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