3.4 测定步骤

3.4.1 提取及净化

称取搅碎混匀的试样约20 g(精确到0.01g)于锥形瓶中，加15 mL乙醇、5 mL硫酸-水(3.2.6),10 g氯化钠(3.2.9)和100 mL-三氯甲烷(3.2.1)。在高速均质器上均质提取5 min。通过快速滤纸过滤，滤液收集于250 mL分液漏斗中。用约50 mL 三氯甲烷分三次洗涤锥形瓶及滤渣，合并洗液于分液漏斗中，于上述分液漏斗中加25 mL氢氧化钠溶液(3.2.8)和50 mL蒸馏水，再加入10 mL饱和氯化钠(3.2.10)。此时水相pH应大于12，否则应补加适量氢氧化钠溶液(3.2.8)对于极易乳化的样品可再补加约3g氯化钠(3.2.9)，振摇提取 2 min。静置分层，弃去三氯甲烷层。用25 mL三氯甲烷洗涤水层两次，弃去三氯甲烷层。再用25 mL乙醚洗涤水层，静置分层，将下层水相转移至另一250 mL分液漏斗中，弃去乙醚层。于上述水相中，加入25 mL硫酸-水(3.2.6)进行酸化，摇匀。水相pH应小于2，否则应适量补加硫酸-水(3.2.6)，然后分别用50 mL、25 mL、25 mL三氯甲烷提取水相。将三氯甲烷提取液收集于250 mL心形瓶中。于60℃水浴中通以氮气流将三氯甲烷挥发至约3～5 mL。完全转移至密封试管(3.3.4)中。再用氮气流于50℃水浴中吹干。

3.4.2 甲酯化

于上述密封试管中，加1 mL甲酯化溶液(3.2.14)，用螺旋盖密封。充分振动混匀，于70℃水浴酯化1h，放冷至室温。以约10 mL硫酸钠溶液(3.2.12)将甲酯液转移至25 mL具塞试管中，分别以4 mL正己烷提取两次。用滴管将正己烷层转移至另一25 mL具塞试管中，用2 mL硫酸钠溶液洗涤正己烷层两次，用滴管吸除水层，将正己烷层转移至10 mL容量瓶并以正己烷定容。吸取上述正己烷溶液3～5 mL于10 mL具塞试管中，加约1g无水硫酸钠，振摇脱水。供气相色谱-质谱分析。

3.4.3 2甲4氯、2甲4氯丁酸标准工作溶液的制备

准确吸取适用浓度的2甲4氯、2甲4氯丁酸标准溶液1 mL(3.2.16)于带螺旋帽盖的试管(3.3.4)中，用氮气流于50℃水浴中吹干，按3.4.2操作进行甲酯化。

3.4.4 测定

3.4.4.1 色谱条件

a)色谱柱：弹性石英毛细柱DB5MS 30 m×0.32 mm(内径)×0.25 um或相当者；

b)柱温程序：

c)汽化室温度：250℃；

d)载气：氦气，纯度99.999%，流速1.2 mL/min;

e)进样方式：无分流；

f)进样量：1 uL。

3.4.4.2 质谱条件

a)接口温度：250℃;

b)离子源：电子轰击源(EI) ;

c)电子能量：70 eV;

d)离子源温度：200℃；

e)检测方式：SIR;

f)选择离子(m/z)及相对丰度(％)：见表2。

表2 选择离子及相对丰度

3.4.4.3气相色谱-质谱测定

对样液(3.4.2)及标准工作溶液(3.4.3)等体积参插进样测定。实际应用的标准工作溶液及待测样液中，2甲4氯甲酯、2甲4氯丁酸甲酯的响应值均应在仪器线性范围内。在上述条件下2甲4氯甲酯、2甲4氯丁酸甲酯保留时间分别约为7.8 min和9.1 min。

3.4.4.4 空白试验

除不加样品外，按上述相同条件和步骤进行。

3.5 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(1)计算，计算结果需扣除空白值。

式中：

X—试样中2甲4氯或2甲4氯丁酸含量，单位为毫克每千克(mg/kg) ;

A—样液中2甲4氯甲酯或2甲4氯丁酸甲酷的峰面积，单位为毫米(mm) ;

A_s—标准溶液中2甲4氯甲酯或2甲4氯丁酸甲酯的峰面积，单位为毫米(mm) ;

c—标准工作溶液中2甲4氯或2甲4氯丁酸浓度，单位为微克每毫升(ug/mL) ;

V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL);

m—最终样液所代表的试样量，单位为克(g)。

4 方法的测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法测定低限为：0.02 mg/kg。

4.2 回收率

牛肉中2甲4氯添加浓度及回收率的实验数据：

在0.02 mg/kg时，回收率为85.5％；

在0.10 mg/kg时，回收率为95.0％;

在0.20 mg/kg时，回收率为92.0％。

牛肉中2甲4氯丁酸添加浓度及回收率的实验数据：

在0.02 mg/kg时，回收率为90.0％;

在0.10 mg/kg时，回收率为90.0％;

在0.20 mg/kg时，回收率为93.0％。

相关链接：进出口肉及肉制品中2甲4氯及2甲4氯丁酸残留量检验方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷农药残留检测方法》

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