(一)原理

试样中的维生素E经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用液相色谱C18反相柱分离维生素E，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。

(二)仪器与主要试剂

高效液相色谱仪带紫外分光检测器；紫外分光光度计；旋转蒸发器；高速离心机。

不含有过氧化物的无水乙醚，检查方法：用5mL乙醚加1mL10％碘化钾溶液，振摇1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加4滴0．5％淀粉溶液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放入纯铁丝或铁末少许。弃去10％初馏液和10％残馏液。

无水乙醇：不得含有醛类物质。检查方法：取2mL银氨溶液于试管中，加入少量乙醇，摇匀，再加入氢氧化钠溶液加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中，取4g氢氧化钠溶于温乙醇中，将两者倾入1L乙醇中，振摇后，放置暗处2天(不时摇动，促进反应)，经过滤，置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸出的50moL。当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。

甲醇：重蒸后使用。重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。抗坏血酸溶液(100g/L)：临用前配制。

银氨溶液：加氨水至硝酸银溶液(50g／L)中，直至生成的沉淀重新溶解为止，再加氢氧化钠溶液数滴，如发生沉淀，再加氨水直至溶解。维生素E标准液：a-生育酚(纯度95％)，γ生育酚(95％) ，δ沪生育酚(纯度95％)。用脱醛乙醇分别溶解以上3种维生素E标准品，使其质量浓度大约为1mL相当于1mg。临用前用紫外分光光度计分别标定此3种维生素E溶液的准确质量浓度。

内标溶液：称取苯并[e]芘(纯度98％)，用脱醛乙醇配制成1mL相当于10μg苯并[e]芘的内标溶液。

(三)测定

准确称取1～10g试样(含维生素E各异构体约为40μg)于皂化瓶中，加30mL无水乙醇搅拌到颗粒物分散均匀为止；加5mL 10％抗坏血酸、苯并[e]芘标准液2.00mL，混匀。加10mL氢氧化钾(1+1)，混匀：于沸水浴回流30min使皂化完全。皂化后立即放入冰水中冷，却将皂化后的试样移入分液漏斗中，用50mL水分2～3次洗皂化瓶，洗液并入分液罾斗中；甩约l00mL乙醚分2次洗皂化瓶及其残渣，乙醚液并入分液漏斗中。如有残渣，可将此液通过有少许脱脂棉的漏斗滤入分液漏斗。轻轻振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去水层。

用约50mL水洗分液漏斗中的乙醚层，用pH试纸检验直至水层不显碱性(最初水洗轻摇．逐次振摇强度可增加)。将乙醚提取液经过无水硫酸钠(约5g)滤入与旋转蒸发器配套的250～300mL球形蒸发瓶内，用约100mL乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠3次，并入蒸发瓶内．将其接至旋转蒸发器上，于55℃水浴中减压蒸馏回收乙醚，待瓶中约剩下2mL乙醚时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹掉乙醚。加入2.00mL乙醇，充分混合，溶解提取物。

将乙醇移移入一小塑料离心管中离心5min(5000 r／min)，上清液供色谱分析。如果试样中鬟生素含量过少?可用氮气将乙醇液吹干后，再用乙醇重新定容，并记下体积比。

(四)说明

①本方法采用 内标法定量。把一定量的维生素a生育酚、β生育酚、δ生育酚及内标苯并[e]芘液混合均匀，选择合适灵敏度，使上述物质的各峰高约为满量程的70％，为高浓度点。高浓度的1／2为低浓度点(其内标苯并[e]芘的浓度值不变)，用此种浓度的混合标准溶液进行色谱分析。以维生素E峰面积与内标物峰面积之比为纵坐标，维生素质量浓度为横坐标绘制维生素E标准曲线。或计算直线回归方程。如有微处理机装置，则按仪器说明用二点内标法进行定量。

②本方法不能将β维生素E和γ维生素E分开，故γ维生素E峰中包含有β维生素E峰。