测定法：取本品适量，精密称定，用水溶解并定量稀释制成每lml中约含20mg的供试品溶液；取肝素钠对照品与硫酸皮肤素对照品适量，精密称定，用水溶解并定量稀释制成每lml中各约含肝素钠20mg和硫酸皮肤素1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(附录V D)测定，以烷醇季铵的乙基乙烯基苯一二乙烯基苯树脂为填充剂(如ASII阴离子交换柱，2mm×250mm，与AGII保护柱，2mm×50mm)；以0．04％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至3．0)为流动相A；以高氯酸钠与一磷酸盐溶液(取高氯酸钠14g，用0．04％磷酸二氢钠溶液溶解并稀释至100m1。用磷酸调节pH值至3.0)为流动相B；流速为每分钟0．22ml；检测波长为202ml。

按下表进行线性梯度洗脱。取系统适用性试验溶液(取硫酸皮肤素对照品、多硫酸软骨素对照品与肝素钠对照品适量，加水溶解并制成每lml中各含硫酸皮肤素0.02mg、多硫酸软骨素0．02mg和肝素钠20mg的混合溶液)注入液相色谱仪，记录色谱图，硫酸皮肤素、肝素钠和多硫酸软骨素的保留时问分别约为20分钟、30分钟和50分钟。

硫酸皮肤素峰与肝素钠峰的分离度应大于10，肝素钠峰与多硫酸软骨素峰的分离度应大于1．5。精密量取供试品和对照品溶液各10，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，与硫酸皮肤素对应的色谱峰的面积不得大于对照品溶液中的硫酸皮肤素峰面积(50％)；主峰后其它杂质按面积归一化法计算，不应大于3.0％。

讨论：

①肝素中的有关物质多为多糖类物质，采用一般色谱方法难以分离，曾采用毛细管电泳法分离测定，但重现性较差，2010年版药典参照美国药典方法，采用离子色谱法分离测定，取得较满意的结果。

②中国药典采用紫外末端吸收202mg波长处检测，和美国药典采用紫外检测方法一致。实际上，也可采用其他检测器如电导检测器。