(三) 系统适用性试验

按各品种项下要求对实验条件进行系统适用性试验，即用供试品和标准物质对实验条件进行试验和调整，应符合规定的要求。

1. 比移值(Rf值)系指从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂前沿的距离的比值。

杂质检查时，各杂质斑点的比移值(Rf值)以在0.2～0.8之间为宜。

2. 检出限系指限量检查或杂质检查时，供试品溶液中被测物质能被检出的最低浓度或量。一般采用已知浓度的供试品溶液或对照标准溶液，与稀释若干倍的自身对照标准溶液在规定的色谱条件下，在同一薄层板上点样、展开、检视，后者显清晰可辨斑点的浓度或量作为检出限。

3. 分离度(或称分离效能)鉴别时，供试品与标准物质色谱中的斑点均应清晰分离。当薄层色谱的扫描法用于限量检查和含量测定时，要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度，分离度(R)的计算公式为：

R=2(d₂-d₁)/(W₁+W₂).........(式7-3)

式中，d₂为相邻两峰中后一峰与原点的距离；d₁为相邻两峰中前一峰与原点的距离；W₁及W₂为相邻两峰各自的峰宽。

除另有规定外，分离度应大于1.0。

4. 相对标准偏差薄层扫描含量测定时，同一供试品溶液在同一薄层板上平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差应不大于5.0%；需显色后测定的或者异板的相对标准偏差应不大于10.0%。

5. 测定法

(1) 鉴别：按各品种项下规定的方法，制备供试品溶液和对照标准溶液，在同一薄层板上点样、展开与检视，供试品色谱图中所显斑点的位置和颜色(或荧光)应与标准物质色谱图的斑点一致。

(2) 限量检查与杂质检查：按各品种项下规定的方法，制备供试品溶液和对照标准溶液，并按规定的色谱条件点样、展开和检视。供试品溶液色谱图中待检查的斑点与相应的标准物质斑点比较，颜色(或荧光)不得更深；或照薄层色谱扫描法操作，测定峰面积值，供试品色谱图中相应斑点的峰面积值不得大于标准物质的峰面积值。含量限度检查应按规定测定限量。

(3) 含量测定：照2015年版《中国药典》四部薄层色谱扫描法(通则0502)，按各品种项下规定的方法，制备供试品溶液和对照标准溶液，并按规定的色谱条件点样、展开、扫描测定；或将待测色谱斑点刮下经洗脱后，再用适宜的方法测定。

二、薄层色谱扫描仪的操作方法

(一) 仪器组成

薄层扫描仪主要由光源、单色器、薄层板台、检测器以及工作站组成。

1. 光源在可见光区域主要使用钨灯(370～700nm)，紫外区多使用钨灯(200～400nm)。此外，还有汞灯、氙灯等。其中汞灯为线光源，可发射特征辐射光谱。

2. 单色器用来提供一定波长的单色光。其结构与一般的紫外分光光度计类似，通常由人射狭缝、出射狭缝、平行光装置、色散组件等组成。薄层扫描仪多采用光栅为其色散组件。

3. 薄层板台扫描时薄层板固定于薄层板台上，薄层板台可横向及纵向移动，以完成对整块薄层板的扫描。

4. 检测器多采用光电倍增管。此外，还有监测入射光能量的参比光电倍增管，以减少入射光强度变化对扫描结果的影响。

5. 工作站可设定仪器参数，接收并存储扫描结果，进行积分和其他计算。

(二) 仪器扫描波长的准确度检查

仪器波长准确度的检查：可利用汞灯的特征谱线光谱对仪器的波长准确度进行检查。选取汞灯，在200～700nm波长范围内以荧光方式对空白硅胶G板扫描吸收图谱，图谱中的峰位波长与汞灯谱线中相应波长的差即为仪器波长准确度。汞灯谱线的已知波长为253.6nm，313.0nm，334.2nm，365.0nm，404.7nm，435.8nm，546.1nm，578.0nm。在CAMAG等仪器的工作站中有专用的仪器检定软件，按要求操作即可自动进行仪器波长准确度等检查。其结果应符合相应仪器的有关规定。

(三) 薄层扫描法定量测定的操作和基本要求

1. 点样应按各品种项下规定，制备的供试品和对照品溶液应交叉点于同一薄层板上，供试品点样不得少于4个，对照品每一浓度不得少于2个。

2. 色谱分离应照薄层色谱法标准操作规程进行操作，保证色谱的质量。

3. 扫描测定测定时应按各品种项下的规定，依据不同仪器的结构特点及使用说明，正确选择仪器参数进行扫描。

(四) 注意事项

1. 除另有规定外，薄层色谱扫描法含量测定应使用市售预制薄层板。

2. 薄层色谱分析的各个步骤如点样、展开等，均会影响薄层扫描结果的准确性与重现性，因此在实验的各个步骤均应严格操作。

3. 扫描时应沿展开方向自下而上进行扫描，不能横向扫描。

4. 测定记录中应包括薄层色谱扫描图，峰面积积分值，工作曲线、回归方程和相关系数，以及测定结果计算方法。

5. 为保证测定结果的准确性，采用外标一点法测定时，供试品斑点应与对照品斑点的峰面积的值相近；采用外标两点法测定时，供试品斑点的峰面积应在两对照品之间。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(五)》

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